24小时热门版块排行榜    

查看: 838  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xynlwt

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR预实验荧光带不上 已有2人参与

如题,SSR的预实验已经做了很久,荧光基团总是加不到目的片段上,而是加在二聚体或者其他杂带上,20ul和10ul体系都能P出来,用的酶是天根的TAQ MIX,引物部分试过三种都失败了,其他水和DNA的比例问题不大。1),F引物:M13F引物:修饰基团:R引物=2:3:5:10。2),F引物:M13F引物:修饰基团:R引物=0.5:0.5:9:10。这种荧光加在目的片段上一点点,峰极低,几乎看不见。3),用了两轮,第一轮,M13F引物:R=1:1。第一轮产物用作第二轮模板,第二轮引物比例为,修饰基团:R引物=1:1。峰还是很低,要么就是依然加在比较短的杂带上。最后想看看正常情况到底应该什么样,就合了一条直接把修饰基团加在F引物上的引物,这次确实加到了目的片段上,但是这种方法太贵了,预实验的话会远超预算,只有预实验先做好了正式实验再用,所以请大神们帮我看看怎样能把这个预实验部分做出来,谢了!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xynlwt

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yingheqian at 2015-05-11 20:16:12
这个效果肯定没有直接标记在引物上好,我们试过引物合成的时候合成长一点的引物,也就是一端(F或R)的引物在其5‘端加上M13引物,第一次PCR就用这个扩增,然后以扩增产物为模板,用荧光标记的M13引物和另一端没有标 ...

感谢您的回复~
6楼2015-05-12 14:16:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

xynlwt

新虫 (初入文坛)

顶一下,给大神们看一看~
2楼2015-05-11 15:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-12 08:03:47
xynlwt: 金币+1, 有帮助 2015-05-12 14:17:31
这个效果肯定没有直接标记在引物上好,我们试过引物合成的时候合成长一点的引物,也就是一端(F或R)的引物在其5‘端加上M13引物,第一次PCR就用这个扩增,然后以扩增产物为模板,用荧光标记的M13引物和另一端没有标记的(R或F)引物,再扩增一次。效果还行。
3楼2015-05-11 20:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吾小豆123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-12 08:03:52
xynlwt: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-12 14:17:17
有篇文献是专门讲这个技术的。An economic method for the fluorescent labeling
of PCR fragments   可以适当调整引物的浓度。
4楼2015-05-11 21:43:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +4 pin8023 2026-02-28 6/300 2026-03-02 06:35 by 汪!?!
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
请填处理意见