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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有木有人做毛细管电泳荧光检测SSR标记的啊~~
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duanhs

银虫 (小有名气)

[交流] 有木有人做毛细管电泳荧光检测SSR标记的啊~~

RT，有哪位大侠做这方面的实验啊~~请教如何准确的读取峰值？读取峰值的标准是什么呢？如何从峰图上看杂合子、纯合子？ 望哪位大侠不吝赐教，小生在此万分感激！！！
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1楼 2011-11-16 09:51:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liweiwei0812

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
duanhs(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励热心交流！ 2011-11-16 16:22:28
上机检测时，每个泳道都有加内标，类似于DNA marker，跑完后用GENE MAPPER数据分析软件分析，设置好你的参数，如片段范围，内标的信息，软件会自动给出峰的数值，看你的目的片段大小范围内是否有目的峰，根据目的峰就可以判断是杂合还是纯合了。
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10楼2011-11-16 16:19:42
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duanhs

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by liweiwei0812 at 2011-11-16 16:19:42:
上机检测时，每个泳道都有加内标，类似于DNA marker，跑完后用GENE MAPPER数据分析软件分析，设置好你的参数，如片段范围，内标的信息，软件会自动给出峰的数值，看你的目的片段大小范围内是否有目的峰，根据目的 ...

对，就是这样，往下呢，我就要听后面的啊~什么样的峰时杂合的？什么样的峰时纯合的？
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13楼2011-11-16 17:08:52
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普通回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)
★
duanhs(金币+1):谢谢参与
我们不自己做，而是交给公司跑的！我也不太清楚，不过你可以问买给你们仪器的公司，打技术支持部！
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2楼2011-11-16 10:07:27
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duanhs

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-11-16 10:07:27:
我们不自己做，而是交给公司跑的！我也不太清楚，不过你可以问买给你们仪器的公司，打技术支持部！

谢谢。我们也是让公司代做，这公司不大，里面的技术人员技术也有限，所以我们老师对他们的数据分析产生一定的怀疑，所以对于数据分析方面我是想多听听大家的经验……
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3楼2011-11-16 10:14:24
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zhangwei19

荣誉版主 (文学泰斗)
★
duanhs(金币+1):谢谢参与
这个不会，祝福早日找到
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4楼2011-11-16 10:30:50
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zhangwei19

荣誉版主 (文学泰斗)
★
duanhs(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
3楼: Originally posted by duanhs at 2011-11-16 10:14:24:
谢谢。我们也是让公司代做，这公司不大，里面的技术人员技术也有限，所以我们老师对他们的数据分析产生一定的怀疑，所以对于数据分析方面我是想多听听大家的经验……

那你们可以换一个正规一点的啊
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5楼2011-11-16 10:31:15
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duanhs

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhangwei19 at 2011-11-16 10:31:15:
那你们可以换一个正规一点的啊

呵呵 关键是已经做完了~~这是我们院自己的公司，没办法~~
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6楼2011-11-16 10:44:14
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zhangwei19

荣誉版主 (文学泰斗)
引用回帖:
6楼: Originally posted by duanhs at 2011-11-16 10:44:14:
呵呵 关键是已经做完了~~这是我们院自己的公司，没办法~~

那确实麻烦点了，但是自己分析的话更不精确啊
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7楼2011-11-16 10:46:42
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duanhs

银虫 (小有名气)
★
wanhscn(金币+1): 确实是要自己核实！不要完全相信所谓的公司！ 2011-11-16 16:21:25
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhangwei19 at 2011-11-16 10:46:42:
那确实麻烦点了，但是自己分析的话更不精确啊

嗯 不过我更想知道确切的数据分析方法，读取数据、区分杂合子或者纯合子的方法啥的~~
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8楼2011-11-16 10:57:05
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wanhscn

木虫 (职业作家)
★
duanhs(金币+1):谢谢参与
一般荧光毛细管电泳，所用的引物PCR产生的条带必须是单一的，才比较合理，如果泳道里全是条带的话，只能跑PAGE胶自己手工读。目前好像是这样！
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11楼2011-11-16 16:24:56
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wanhscn

木虫 (职业作家)
我感觉这个毛细管的原理应该是利用激光器激发荧光后对整个泳道进行扫描，并记录整个泳道的荧光峰值。对于亲本只有单一条带的引物而言，亲本1和亲本2应该只有一个荧光峰值，但是其在毛细管中的位置不一样，而对于子代F1，杂合的就有两个峰值，其为两个亲本的相加！
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12楼2011-11-16 16:29:26
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wanhscn

木虫 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by duanhs at 2011-11-16 17:08:52:
对，就是这样，往下呢，我就要听后面的啊~什么样的峰时杂合的？什么样的峰时纯合的？

你可以粘个峰图给我看看!
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14楼2011-11-16 18:50:16
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植物园园长

金虫 (小有名气)
★
duanhs(金币+1): 谢谢参与
这好办，问一下院公司用的是哪家公司哪个型号的仪器，然后打电话给这个公司技术支持。
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16楼2012-10-19 08:50:48
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
★
duanhs(金币+1): 谢谢参与
给你举个例子，假如你纯合体在某对引物下出来的是一条带，那么是一个峰图，杂合体应该是两个峰，而且两个峰的高度差不多！那个峰跟你跑胶的带一个意思，峰值越高你要是跑胶的话带就越亮！
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17楼2012-10-19 09:22:40
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匿名

用户注销 (职业作家)
★
duanhs(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
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18楼2014-06-09 23:06:45
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余国辉

新虫 (初入文坛)
★
duanhs(金币+1): 谢谢参与
现在关于标准貌似没有一个严格标准，不过在确定倍性的基础上杂合子、纯合子鉴定跟上述大虾说的基本一致，没有了这个前提，恐怕就困难了
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19楼2014-06-16 16:57:23
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简单回复
davidfrela9楼
2011-11-16 11:04   回复  
duanhs(金币+1):谢谢参与
lijiangweiyp15楼
2012-10-18 21:56   回复  
duanhs(金币+1): 谢谢参与
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