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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 彗星实验,荧光显微镜下找不到DNA是怎么回事
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毒理小蚊子

铜虫 (初入文坛)

[求助] 彗星实验,荧光显微镜下找不到DNA是怎么回事 已有2人参与

配置细胞悬浮液的时候,也看到了很多细胞,不可能是细胞浓度低.
EB染色时间也挺长的.
荧光显微镜我用的是红光,将光线调的很暗,可就是找不到DNA.看不到红色的实心圆.
是不是我荧光显微镜没有调好,还是因为我事先用乙醇固定后第二天才开始染色观察的呢?
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1楼 2013-03-13 12:28:59
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you_and_me

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要先关闭激光，在明场条件下调好焦距再调到激光状态。还有中可能染色剂问题
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2楼2013-03-13 21:28:22
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毒理小蚊子

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by you_and_me at 2013-03-13 21:28:22
需要先关闭激光，在明场条件下调好焦距再调到激光状态。还有中可能染色剂问题

刚才我又去看了,还是什么都看不放,我都不确定看到的是不是气泡?
荧光显微镜下的DNA很好找吗,为什么我什么都看不到.
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3楼2013-03-14 11:39:31
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you_and_me

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 毒理小蚊子 at 2013-03-14 11:39:31
刚才我又去看了,还是什么都看不放,我都不确定看到的是不是气泡?
荧光显微镜下的DNA很好找吗,为什么我什么都看不到....

你铺胶时有气泡吗？我觉得气泡应该不会被染上颜色吧。有时候挺难找的，耐心点。你得确定染色剂没问题啊
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4楼2013-03-14 22:50:21
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毒理小蚊子

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by you_and_me at 2013-03-14 22:50:21
你铺胶时有气泡吗？我觉得气泡应该不会被染上颜色吧。有时候挺难找的，耐心点。你得确定染色剂没问题啊...

铺胶时没有,我在10倍和40倍的物镜下,看到的都是小圆点 ,那就肯定不是DNA了,一般40倍的物镜一个视野里一个.晕死.
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5楼2013-03-15 10:43:05
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you_and_me

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那圆点可能是正常的细胞核吧，那说明没有跑出彗星吧
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6楼2013-03-15 19:25:52
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毒理小蚊子

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by you_and_me at 2013-03-15 19:25:52
那圆点可能是正常的细胞核吧，那说明没有跑出彗星吧

我甚至觉得可能是裂解液出了问题,还有,为什么我的荧光显微镜观看背景很亮,我看到别人拍的照片 背景差不多是黑的 ,荧光效果非常好.
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7楼2013-03-17 16:46:26
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you_and_me

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

荧光剂浓度太大了吧
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8楼2013-03-19 21:37:26
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aixia5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做一个没有电泳的，有细胞的片子直接固定染色看看，如果这个看不到的话是染色的问题。
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9楼2013-03-20 11:04:46
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aixia5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

20µg/mL的EB染液常温下染色，15～20min；你是用casp软件进行数据分析的么？你裂解和电泳分别是多长时间？
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10楼2013-03-20 11:16:33
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