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黄xia金虫 (小有名气)
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[交流]
蛋白纯化问题，希望大家给我支支招，成分感谢 已有8人参与
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| 我的蛋白70多KD，上清表达，表达量还可以，在C端加了6His标签，用生工的Ni柱填料挂柱纯化，洗脱后，洗脱液中无目的蛋白，只有杂蛋白，目的蛋白在流穿液当中，说明没挂上，（平衡缓冲液pH8.0，蛋白的等电点4.6左右，上样流速尝试过0.4和0.5ml/min），由于没挂上，打算用切非变性胶的方式纯化，来做后续实验，但将切下的胶电透浓缩后，跑SDS-PAGE分析，有很多杂带，目的条带的量也少，与杂带量差不多，在切的过程中，有时候还切不到自己的目的蛋白，怎么办呀，我已经就纯化蛋白这个问题做了很久了，还没啥进展，希望各位有经验的亲给我一些建议，谢谢谢谢........无数个谢谢。 |
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mataomatao
禁虫 (正式写手)
★ ★
黄xia: 金币+2, 谢谢 2015-05-12 22:54:02
黄xia: 金币+2, 谢谢 2015-05-12 22:54:02
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22楼2015-05-12 17:23:19
mataomatao
禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
黄xia: 金币+2, 谢谢，当然能教我如何点突变就更好了，呵呵，不过貌似有点不现实哈 2015-05-12 22:53:39
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
黄xia: 金币+2, 谢谢，当然能教我如何点突变就更好了，呵呵，不过貌似有点不现实哈 2015-05-12 22:53:39
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24楼2015-05-12 19:51:54
mataomatao
禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
黄xia: 金币+2, 不过在引物里面加，那Gly和Histag之间不就隔了酶切位点，这样也可以吗，跟大家交流，虽然还是有很多不懂，但也觉得学到好多东西，谢谢 2015-05-12 22:51:03
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
黄xia: 金币+2, 不过在引物里面加，那Gly和Histag之间不就隔了酶切位点，这样也可以吗，跟大家交流，虽然还是有很多不懂，但也觉得学到好多东西，谢谢 2015-05-12 22:51:03
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25楼2015-05-12 19:55:41
mataomatao
禁虫 (正式写手)
★ ★
黄xia: 金币+2, 谢谢 2015-05-14 09:04:15
黄xia: 金币+2, 谢谢 2015-05-14 09:04:15
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31楼2015-05-13 16:32:10