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细胞裂解液与酶解的兼容性
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本人想做的实验是将Hela细胞裂解提取蛋白后，还原烷基化胰酶酶解，最后SPE纯化后用LC-MS/MS分析。我们实验室刚好有人也在做细胞中蛋白的分析，他们使用的是RIPA强裂解液，里面的裂解成分主要是1% Triton X-100，1% 脱氧胆酸钠和0.1% SDS。不过他们提出的蛋白后面都是先跑胶的，基本不用液质分析或者也是跑完胶后再分析。 我的问题是这种RIPA裂解液适用于我的实验吗？不知道里面的表面活性剂成分会不会影响后续的酶解操作。我看文献中做后续质谱分析的大多用的含8 M尿素而不含表面活性剂的裂解液，是因为尿素也可以裂解细胞吗？尿素稀释到2 M以下就可以用Trypsin酶解，RIPA稀释后可以吗？ 尿素裂解液里面的成分较多，不少试剂还得现买。RIPA实验室有现成的，如果RIPA和后面的实验不冲突还是希望能用RIPA做了。 第一次提问，希望大家能帮忙解惑。不胜感激。 |
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2楼2018-02-06 11:08:56