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汕头大学海洋科学接受调剂
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

[求助] DTNB怎么溶解 已有1人参与

试了pH7.4的PBS溶解,效果不行,仍然有粉末状,感觉就没溶解。请教各位虫子们,用什么溶剂可以使DTNB更快的溶解,或者溶解DTNB关键是什么,是pH吗?非常感谢,急急急!
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山凝冰

铜虫 (小有名气)

将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中,定容至100mL,用此溶液可以溶解,我正在做这方面的工作
欲戴皇冠,必承其重!
7楼2015-05-14 10:49:05
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普通回帖

zzlaile123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

再加一点edta,少加一点

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
相信自己科研成功
2楼2015-05-10 23:29:24
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zzlaile123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
tongqingjia: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-11 22:34:32
edta大概100ml缓冲溶液中加了0.0292g,浓度你自己算下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
相信自己科研成功
3楼2015-05-10 23:30:23
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zzlaile123 at 2015-05-10 23:29:24
再加一点edta,少加一点

谢谢!

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-05-11 22:34:18
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zzlaile123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tongqingjia at 2015-05-11 22:34:18
谢谢!
...

解决问题了吧   浓度你自己确定哈  你是测什么物质的巯基
相信自己科研成功
5楼2015-05-12 16:21:10
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zzlaile123 at 2015-05-12 16:21:10
解决问题了吧   浓度你自己确定哈  你是测什么物质的巯基...

为什么要加edta?能不能说一下

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-05-13 13:40:51
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 山凝冰 at 2015-05-14 10:49:05
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中,定容至100mL,用此溶液可以溶解,我正在做这方面的工作

好的,我试试。其他的缓冲液像hepes,tris可以吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-05-14 13:22:26
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1012203014

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 山凝冰 at 2015-05-14 10:49:05
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中,定容至100mL,用此溶液可以溶解,我正在做这方面的工作

测定总巯基含量时,15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液(0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0)。测定自由巯基含量时,15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中,而后加入50 μL Ellman 试剂 (DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液,4 mg/mL),在25℃条件下保温反应60 min, 离心(5000 g, 15 min),上清液在412 nm 处测定吸光值,以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下:
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中:A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度(mg/mL)
问题1:上述公式中稀释倍数D是怎么算的(具体的式子),如果完全按照上述方法是不是就是1?
问题2:我测的物质为毛发固体样品,二硫键含量在350μmol/g附近,此种测试方法是否具有可行性
问题3:由于毛发样品中含有非水溶性蛋白,又没哟测量二硫键含量的更好的方法
美女如能解答我的问题,必当重谢!!
奋斗!永不止步!
9楼2015-10-07 21:19:42
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1012203014

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2015-10-09 21:30:01
引用回帖:
7楼: Originally posted by 山凝冰 at 2015-05-14 10:49:05
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中,定容至100mL,用此溶液可以溶解,我正在做这方面的工作

测定总巯基含量时,15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液(0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0)。测定自由巯基含量时,15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中,而后加入50 μL Ellman 试剂 (DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液,4 mg/mL),在25℃条件下保温反应60 min, 离心(5000 g, 15 min),上清液在412 nm 处测定吸光值,以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下:
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中:A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度(mg/mL)
问题1:上述公式中稀释倍数D是怎么算的(具体的式子),如果完全按照上述方法是不是就是1?
问题2:我测的物质为毛发固体样品,二硫键含量在350μmol/g附近,此种测试方法是否具有可行性
问题3:由于毛发样品中含有非水溶性蛋白,又没哟测量二硫键含量的更好的方法
美女如能解答我的问题,必当重谢!!
奋斗!永不止步!
10楼2015-10-07 21:20:01
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