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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » DTNB怎么溶解
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

[求助] DTNB怎么溶解 已有1人参与

试了pH7.4的PBS溶解，效果不行，仍然有粉末状，感觉就没溶解。请教各位虫子们，用什么溶剂可以使DTNB更快的溶解，或者溶解DTNB关键是什么，是pH吗？非常感谢，急急急！
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1楼 2015-04-25 10:06:44
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山凝冰

铜虫 (小有名气)
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中，定容至100mL，用此溶液可以溶解，我正在做这方面的工作
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欲戴皇冠，必承其重！
7楼2015-05-14 10:49:05
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zzlaile123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

再加一点edta，少加一点

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相信自己科研成功
2楼2015-05-10 23:29:24
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zzlaile123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
tongqingjia: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-11 22:34:32
edta大概100ml缓冲溶液中加了0.0292g，浓度你自己算下

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相信自己科研成功
3楼2015-05-10 23:30:23
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zzlaile123 at 2015-05-10 23:29:24
再加一点edta，少加一点

谢谢！

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4楼2015-05-11 22:34:18
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zzlaile123

木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by tongqingjia at 2015-05-11 22:34:18
谢谢！
...

解决问题了吧   浓度你自己确定哈  你是测什么物质的巯基
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相信自己科研成功
5楼2015-05-12 16:21:10
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zzlaile123 at 2015-05-12 16:21:10
解决问题了吧   浓度你自己确定哈  你是测什么物质的巯基...

为什么要加edta？能不能说一下

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6楼2015-05-13 13:40:51
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 山凝冰 at 2015-05-14 10:49:05
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中，定容至100mL，用此溶液可以溶解，我正在做这方面的工作

好的，我试试。其他的缓冲液像hepes,tris可以吗？

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8楼2015-05-14 13:22:26
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1012203014

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 山凝冰 at 2015-05-14 10:49:05
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中，定容至100mL，用此溶液可以溶解，我正在做这方面的工作

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法
美女如能解答我的问题，必当重谢！！
赞一下 回复此楼
奋斗！永不止步！
9楼2015-10-07 21:19:42
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1012203014

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2015-10-09 21:30:01
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7楼: Originally posted by 山凝冰 at 2015-05-14 10:49:05
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中，定容至100mL，用此溶液可以溶解，我正在做这方面的工作

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法
美女如能解答我的问题，必当重谢！！
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奋斗！永不止步！
10楼2015-10-07 21:20:01
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