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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » 【求助】求助：乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题
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laiyin_111

木虫 (正式写手)

梦想家

[交流] 【求助】求助：乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题已有8人参与

文献上说来自电鳗的乙酰胆碱酯酶AChE (lyophilised powder; 292 U/mg solid; 394 U/mg protein)，请问它的单位是什么意思啊？

还有就是我如果购买500U/mg 的酶（或者是2000U/ mg) ，那么如何将它配制成1000U/mL的溶液呢？是直接用去离子水溶解还是其他什么缓冲液啊？

一般酶溶液制备后能存放多久呢？
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xiaohuizh16

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想想现在，有事可做，即是幸福~
1楼2010-10-16 17:21:00
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liutaoliu

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-12-12 18:35:08
第一个问题在网络或课本上很容易查到，以后不许偷懒啊，呵呵。U----酶活力的度量单位。1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。
第二个问题，U/mg是用来计算你买的酶的量，你要是用2000U/mg的酶配1000U/mL的溶液，就用2000U/mg乘以酶的质量（说明书上有）再除以1000U/mL，就算出体积了。一般用PBS缓冲溶液，可能也有用其他的。pH中性左右，配完后冷冻保存，用的话，拿出一些于4摄氏度保存，尽量快点用，放置时间不宜过长。几个月是没问题的。
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开心就笑，不开心就等会儿再笑
5楼2010-12-12 09:56:37
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普通回帖

dixiaxia

禁虫 (小有名气)
laiyin_111(金币+10):没人回答，就送你吧！你运气真好！O(∩_∩)O哈哈~ 2010-10-21 12:38:23
本帖内容被屏蔽
2楼2010-10-17 21:55:07
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laiyin_111

木虫 (正式写手)

梦想家
引用回帖:
Originally posted by laiyin_111 at 2010-10-16 17:21:00:
文献上说来自电鳗的乙酰胆碱酯酶AChE (lyophilised powder; 292 U/mg solid; 394 U/mg protein)，请问它的单位是什么意思啊？

还有就是我如果购买500U/mg 的酶（或者是2000U/ mg) ，那么如 ...

紧急求助

[ Last edited by laiyin_111 on 2010-10-17 at 21:58 ]
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想想现在，有事可做，即是幸福~
3楼2010-10-17 21:56:31
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laiyin_111

木虫 (正式写手)

梦想家
引用回帖:
Originally posted by dixiaxia at 2010-10-17 21:55:07:
学习。。。

夏夏你这头像，呵呵~~
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想想现在，有事可做，即是幸福~
4楼2010-10-17 22:00:24
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laiyin_111

木虫 (正式写手)

梦想家
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-12 09:56:37:
第一个问题在网络或课本上很容易查到，以后不许偷懒啊，呵呵。U----酶活力的度量单位。1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是 ...

呵呵，非常感谢你的帮助！我明天正好就要去配酶溶液了呵呵，你的回复真及时真好~哈哈
谢谢你！我已经明白啦！呵呵，以后我不偷懒了，得好好做实验好好查文献好好学习~(*^__^*) 嘻嘻……
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6楼2010-12-12 12:39:56
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xiaohuizh16
送鲜花一朵
7楼2011-10-09 21:37:43
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想念紫叶李

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by laiyin_111 at 2010-12-12 12:39:56
呵呵，非常感谢你的帮助！我明天正好就要去配酶溶液了呵呵，你的回复真及时真好~哈哈
谢谢你！我已经明白啦！呵呵，以后我不偷懒了，得好好做实验好好查文献好好学习~(*^__^*) 嘻嘻……...

楼主，想请问下你，你是用什么溶液来配乙酰胆碱酯酶的母液，而且浓度多大比较合适啊？
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8楼2013-04-24 20:11:16
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laiyin_111

木虫 (正式写手)

梦想家
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8楼: Originally posted by 想念紫叶李 at 2013-04-24 00:11:16
楼主，想请问下你，你是用什么溶液来配乙酰胆碱酯酶的母液，而且浓度多大比较合适啊？...

10 U/mL储备液：将500 U/mg的AChE灰白色固体粉末用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得；
0.22 U/mL工作液：取220 μL的10 U/mL储备液，用缓冲液B溶解，定容至10 mL量瓶中，摇匀即得。

其中，缓冲液A：50 mM Tris-HCl，pH 8.0；
称取3.03 g Tris，精密称定，加入到375 mL去离子水中，在电磁搅拌下滴加浓盐酸至pH 8.0 (25℃)，再向其中加入去离子水，定容至500 mL量瓶中，即得。
缓冲液B：50 mM Tris-HCl，pH 8.0，含有0.1%（w/v）牛血清白蛋白（BSA），用来稳定酶；
称取0.05 g BSA，精密称定后用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得（注意BSA容易产生气泡，所以定容时不要剧烈振摇，要轻轻操作，防止产生气泡）。
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想想现在，有事可做，即是幸福~
9楼2013-04-24 21:14:24
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laiyin_111

木虫 (正式写手)

梦想家
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8楼: Originally posted by 想念紫叶李 at 2013-04-24 00:11:16
楼主，想请问下你，你是用什么溶液来配乙酰胆碱酯酶的母液，而且浓度多大比较合适啊？...

10U/mL的储备液我用具塞塑料试管分装后冻存于-20°冰箱中。
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想想现在，有事可做，即是幸福~
10楼2013-04-24 21:18:04
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