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cxbaoa

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】紧急求助!关于紫外末端吸收!!已有4人参与

手头两个药物,异环磷酰胺和环孢素A,需要利用紫外测药物浓度。
两年前我就做过异环磷酰胺,没做出来,利用紫外做标准曲线求浓度的。因为异环磷酰胺是在204nm的最大吸收峰,标准曲线能做出来,但是做药物缓释的时候浓度通过标准曲线计算就忽大忽小,得不出缓释的规律。当时网上查了一下有人说200-210是紫外末端吸收,数据是不可靠的,还尝试过高效液相色谱,都没做出确切的数据,实验因此就搁置了。
现在导师又提起来,还加了一个环孢素A,我一查,晕,又是一个紫外吸收很弱的,导师认为我的实验有问题而不是紫外的原因,他甚至拿出他的博士论文,说他以前在190nm测聚丙烯酰胺的浓度都没问题。而且说高效液相也是紫外检测器,原理一样的。绝对是我实验的问题。现在有些头大。
请教大家,
1:做紫外:200左右的吸收峰是不是只要标准曲线能做出来,相关度也还不错,那就是可以测出浓度的?(不要求每个点的精确性,要求得到一个规律性的趋势就行。)确实是我自己试验的问题而与紫外无关?
(另外目前的试验条件只能利用紫外分光光度计。)
2:如何正确理解紫外末端吸收?
谢谢大家!!
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淡淡欢喜淡淡愁
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zhuiyu_

金虫 (正式写手)

cxbaoa(金币+1):谢谢,我只能用紫外,不用高效液相 2010-07-20 14:51:50
一般很少用到210以下的检测波长的。如果要用到210nm以下的检测波长,流动相在液相中会有吸收,所以选择不同牌子的有机相也是很重要的。有的牌子有机相比较好的,在末端吸收干扰比较小。如果用到酸碱调节PH的,最好也用色谱级别的。我觉得最好流动相条件重新选择,最好用乙腈。虽然比较贵,但是乙腈比甲醇好一些。
2楼2010-07-20 12:04:22
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音

cxbaoa(金币+1):谢谢 2010-07-20 14:52:06
1.有人说200-210是紫外末端吸收,数据是不可靠的,这个说法是对的

2.吸收波长在210以下干扰非常大,基线漂的不行了,溶剂都有干扰

3.解决方法:1.换非紫外检测器,2.衍生化药物
Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
3楼2010-07-20 12:31:15
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zhbsky

金虫 (正式写手)

如何正确理解紫外末端吸收?

cxbaoa(金币+2):感谢 2010-07-25 22:08:14
cxbaoa(金币+2):非常感谢 2010-07-25 22:08:43
1.含测问题:当检测波长<203nm,使用紫外检测器的高效液相法众人皆知是有问题的,你的导师说:"在190nm测聚丙烯酰胺的浓度,采用紫外检测器的高效液相法都没问题",人间传奇!化学药品,试样组成简单,主成分若有紫外吸收,一般采用紫外分光的方法就可搞定,不需“兴师动众”,若有二次干扰吸收,可采用双波长或三波长紫外分光光度法;若是一次干扰吸收(线性背景),可采用一阶导数紫外分光光度法。
2:如何正确理解紫外末端吸收?
这很简单,峰位于远紫外光区(10-200nm),在近紫外光区(200-400nm)只检测到该峰末端部分,这部分的吸收被称为~,一般由n→σ*跃迁所产生。

[ Last edited by zhbsky on 2010-7-24 at 05:56 ]
4楼2010-07-23 23:40:19
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xkp123

木虫 (著名写手)

cxbaoa(金币+2):感谢 2010-07-25 22:08:54
确实,因为大部分物质在紫外截止区都有很强烈的吸收,所以得到的数据肯定不准,建议最好不要用这么低的波长
5楼2010-07-24 09:25:41
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那年小宇

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在200nm那里因为一起存在噪音的关系会出现一些不规则的波峰,所以还是不要以太波长处的峰作为参考。还有,你会所你的那个吸收峰很弱也有可能是比色皿的问题,换个新的试试
我活着,精彩着~~~~
6楼2012-12-10 18:18:17
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喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
目前的试验条件只能利用紫外分光光度计的话,最好的办法就是对样品进行衍生化处理,204nm其实不太好,如果你用HPLC还是可以的
生命不息,奋斗不止
7楼2013-01-06 11:22:31
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