应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教：为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收？
181/1返回列表
查看: 3189  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liutaoliu

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教：为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收？

为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收？条件：pH7,PBS;0.02U/uL,请高手指点，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-23 20:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-24 10:20:56
liutaoliu(金币+3):谢谢 2010-12-31 08:09:25
你不会是没有加底物就去测吸收值吧？蛋白的吸收峰往往在280nm处。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-23 20:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-24 10:20:45
liutaoliu(金币+3):谢谢 2010-12-31 08:09:44
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-23 20:34:27:
为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收？条件：pH7,PBS;0.02U/uL,请高手指点，谢谢！

你测的是乙酰胆碱酯酶，还是酶反应的产物啊？

酶的话，蛋白质，吸收峰280nm
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-12-23 20:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-23 20:37:47:
你不会是没有加底物就去测吸收值吧？蛋白的吸收峰往往在280nm处。

谢谢回复，但我看文献上就是测的酶的啊（见下图），一直没搞明白。请问您测过吗？是测的底物氯化乙酰硫代胆碱吗？是的话，它的峰在哪儿？谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-24 09:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-23 20:40:25:


你测的是乙酰胆碱酯酶，还是酶反应的产物啊？

酶的话，蛋白质，吸收峰280nm

我测的是酶，请问您测的什么？要是测底物ATCl的话，峰在哪儿？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-24 09:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
liutaoliu(金币+18):谢谢指点 2010-12-31 08:10:34
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-24 09:45:35:

谢谢回复，但我看文献上就是测的酶的啊（见下图），一直没搞明白。请问您测过吗？是测的底物氯化乙酰硫代胆碱吗？是的话，它的峰在哪儿？谢谢

以乙酰硫代胆碱（AsCh）为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410nm处有最大吸收峰，用分光光度计可测得酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。


再看看你的那篇文献中的表述，我怀疑这个图注有问题。你把方法和这个图的result 以及disccusion一起贴出来看看。
赞一下 回复此楼
6楼2010-12-24 10:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
我没侧过这个酶。楼主还不如先跑标准品，看看哪里出峰。
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-24 11:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-24 10:46:02:



以乙酰硫代胆碱（AsCh）为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410nm处有最 ...

好的，我们的目的是想表征酶与某一材料结合后活性未发生太大变化，我看一般都是以ACHE峰位置变化不大来表明，要是看DTNB的峰的话，理论上峰位置应该固定的，只是强度变化。谢谢了！
赞一下 回复此楼
8楼2010-12-24 11:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-24 11:46:18:

好的，我们的目的是想表征酶与某一材料结合后活性未发生太大变化，我看一般都是以ACHE峰位置变化不大来表明，要是看DTNB的峰的话，理论上峰位置应该固定的，只是强度变化。谢谢了！
[img]http://pic.muchong.com ...

恩，理解这段话的意思了。这个酶在这块儿本身就有一个吸收峰，叫Soret band，这个band能反映出蛋白的构象。然后这个酶固定化之后，这个封还存在于这个位置能够说明固定化成功了。

你现在的问题是你的这个酶在这儿没有吸收峰。

那你做固定化试验了么，固定后在这里有峰出现么？ 400之后貌似就是可见光范围了。你用的是紫外可见分光光度计么？

我看不同的地方说这个峰不固定，还有在410-420的，你那里的分光光度计能做波长扫描么？最好能扫一下350-450这段。
赞一下 回复此楼
9楼2010-12-24 12:27:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
谢谢楼上热心的兄弟（姐妹）们了，呵呵
赞一下 回复此楼
10楼2010-12-24 13:16:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-24 12:27:24:



恩，理解这段话的意思了。这个酶在这块儿本身就有一个吸收峰，叫Soret band，这个band能反映出蛋白的构象。然后这个酶固定化之后，这个封还存在于这个位置能够说明固定化成功了。

你现在的问题是你的这个 ...

是的，可我固定前后均没有这个吸收峰，很是郁闷。Soret band我一直没弄明白，百度解释是卟啉化合物的吸收峰，可是AChE含卟啉结构吗？我们的仪器是紫外-可见，您说的波长扫描，意思是不是设定波长范围啊？我设的是700-200nm，有问题吗?
赞一下 回复此楼
11楼2010-12-24 13:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-24 13:45:34:

是的，可我固定前后均没有这个吸收峰，很是郁闷。Soret band我一直没弄明白，百度解释是卟啉化合物的吸收峰，可是AChE含卟啉结构吗？我们的仪器是紫外-可见，您说的波长扫描，意思是不是设定波长范围啊？我设的 ...

AChE应该不含有卟啉环的。

具有波长扫描的分光光度计， 设置一定范围，然后机器就一个纳米一个纳米走波长。
赞一下 回复此楼
12楼2010-12-24 13:51:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-24 13:51:24:


AChE应该不含有卟啉环的。

具有波长扫描的分光光度计， 设置一定范围，然后机器就一个纳米一个纳米走波长。

那我做的时候波长就是从高到低慢慢扫的
赞一下 回复此楼
13楼2010-12-24 14:35:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-24 13:51:24:


AChE应该不含有卟啉环的。

具有波长扫描的分光光度计， 设置一定范围，然后机器就一个纳米一个纳米走波长。

DTNB会不会有所谓的soret band？我越来越觉得应该是加入DTNB的峰
赞一下 回复此楼
14楼2010-12-24 14:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-24 14:37:50:

DTNB会不会有所谓的soret band？我越来越觉得应该是加入DTNB的峰

你再仔细看看这篇文章的methods部分
赞一下 回复此楼
15楼2010-12-24 15:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-24 15:18:50:


你再仔细看看这篇文章的methods部分

由于文章是电化学的，所以光学部分的描述很少，根本没有写方法，只有仪器。我查阅了一下其他文献，觉得应该是这样的：那个410nm左右的峰是TNB的。由于卟啉结构的化合物在410nm处也有吸收峰，与TNB的很接近，所以可能有人就把这个位置的峰称为soret band。作者引的那篇文献上虽有soret band,但那篇文章是有关血红蛋白（含卟啉结构）的，就血红蛋白而言，soret band确实反映了其结构。但将其引来证明乙酰胆碱酯酶结构有些断章取义，也不应用吸收峰的移动来证明，而是应该用峰的强度来证明酶固定前后的活性变化。不知您对我的看法有何意见？
赞一下 回复此楼
16楼2010-12-24 16:50:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-24 16:50:29:

由于文章是电化学的，所以光学部分的描述很少，根本没有写方法，只有仪器。我查阅了一下其他文献，觉得应该是这样的：那个410nm左右的峰是TNB的。由于卟啉结构的化合物在410nm处也有吸收峰，与TNB的很接近，所以 ...

我觉得那个峰并不能算是移动了，只是基线高了，你再看看图。峰还是在原来的波长位置，所以说用这个来证明固定上了是说得通的。

如果只有含卟啉环的蛋白才能用那个band来反映其构象的话，那这篇文章中的文献25的引用是误导或者根本就是错的。
赞一下 回复此楼
17楼2010-12-31 08:59:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-31 08:59:51:



我觉得那个峰并不能算是移动了，只是基线高了，你再看看图。峰还是在原来的波长位置，所以说用这个来证明固定上了是说得通的。

如果只有含卟啉环的蛋白才能用那个band来反映其构象的话，那这篇文章中的文 ...

非常感谢！
回复此楼
18楼2010-12-31 09:39:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liutaoliu 的主题更新
181/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 6/300 2026-08-25 08:44 by 白大多亮
[基金申请] 我面上完蛋了 +12 且听虎啸 2026-08-20 13/650 2026-08-25 08:42 by 绘中天
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭