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liutaoliu

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教：为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收？

为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收？条件：pH7,PBS;0.02U/uL,请高手指点，谢谢！
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1楼 2010-12-23 20:34:27
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-24 11:46:18:

好的，我们的目的是想表征酶与某一材料结合后活性未发生太大变化，我看一般都是以ACHE峰位置变化不大来表明，要是看DTNB的峰的话，理论上峰位置应该固定的，只是强度变化。谢谢了！
[img]http://pic.muchong.com ...

恩，理解这段话的意思了。这个酶在这块儿本身就有一个吸收峰，叫Soret band，这个band能反映出蛋白的构象。然后这个酶固定化之后，这个封还存在于这个位置能够说明固定化成功了。

你现在的问题是你的这个酶在这儿没有吸收峰。

那你做固定化试验了么，固定后在这里有峰出现么？ 400之后貌似就是可见光范围了。你用的是紫外可见分光光度计么？

我看不同的地方说这个峰不固定，还有在410-420的，你那里的分光光度计能做波长扫描么？最好能扫一下350-450这段。
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9楼2010-12-24 12:27:24
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-24 10:20:56
liutaoliu(金币+3):谢谢 2010-12-31 08:09:25
你不会是没有加底物就去测吸收值吧？蛋白的吸收峰往往在280nm处。
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2楼2010-12-23 20:37:47
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-24 10:20:45
liutaoliu(金币+3):谢谢 2010-12-31 08:09:44
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-23 20:34:27:
为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收？条件：pH7,PBS;0.02U/uL,请高手指点，谢谢！

你测的是乙酰胆碱酯酶，还是酶反应的产物啊？

酶的话，蛋白质，吸收峰280nm
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3楼2010-12-23 20:40:25
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liutaoliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-23 20:37:47:
你不会是没有加底物就去测吸收值吧？蛋白的吸收峰往往在280nm处。

谢谢回复，但我看文献上就是测的酶的啊（见下图），一直没搞明白。请问您测过吗？是测的底物氯化乙酰硫代胆碱吗？是的话，它的峰在哪儿？谢谢
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4楼2010-12-24 09:45:35
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