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liutaoliu

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】请教:为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收?

为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收?条件:pH7,PBS;0.02U/uL,请高手指点,谢谢!
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引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-24 11:46:18:

好的,我们的目的是想表征酶与某一材料结合后活性未发生太大变化,我看一般都是以ACHE峰位置变化不大来表明,要是看DTNB的峰的话,理论上峰位置应该固定的,只是强度变化。谢谢了!
[img]http://pic.muchong.com ...

恩,理解这段话的意思了。这个酶在这块儿本身就有一个吸收峰,叫Soret band,这个band能反映出蛋白的构象。然后这个酶固定化之后,这个封还存在于这个位置能够说明固定化成功了。

你现在的问题是你的这个酶在这儿没有吸收峰。

那你做固定化试验了么,固定后在这里有峰出现么? 400之后貌似就是可见光范围了。你用的是紫外可见分光光度计么?

我看不同的地方说这个峰不固定,还有在410-420的,你那里的分光光度计能做波长扫描么?最好能扫一下350-450这段。
9楼2010-12-24 12:27:24
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-24 10:20:56
liutaoliu(金币+3):谢谢 2010-12-31 08:09:25
你不会是没有加底物就去测吸收值吧?蛋白的吸收峰往往在280nm处。
2楼2010-12-23 20:37:47
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rioarsenal

金虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-24 10:20:45
liutaoliu(金币+3):谢谢 2010-12-31 08:09:44
引用回帖:
Originally posted by liutaoliu at 2010-12-23 20:34:27:
为什么我的乙酰胆碱酯酶在400nm处没有紫外吸收?条件:pH7,PBS;0.02U/uL,请高手指点,谢谢!

你测的是乙酰胆碱酯酶,还是酶反应的产物啊?

酶的话,蛋白质,吸收峰280nm
3楼2010-12-23 20:40:25
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liutaoliu

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-23 20:37:47:
你不会是没有加底物就去测吸收值吧?蛋白的吸收峰往往在280nm处。

谢谢回复,但我看文献上就是测的酶的啊(见下图),一直没搞明白。请问您测过吗?是测的底物氯化乙酰硫代胆碱吗?是的话,它的峰在哪儿?谢谢
4楼2010-12-24 09:45:35
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