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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 光吸收值是产物的还是底物的
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云琪

新虫 (小有名气)

[求助] 光吸收值是产物的还是底物的

漆酶:5 mL 反应体系中，加入 3.6 mL（0.219mol/L） pH4.5 醋酸缓冲液，400 μL 0.01 mmol/L 愈创木酚，1 mL 粗酶液，充分混匀后，30℃准确反应 30 min，冰浴终止反应，立即在 465 nm 处比色，测定反应30 min 内酶活的变化，以热灭活酶液做对照。每分钟每 μmol 愈创木酚被氧化所需的酶量为一个活力单位（U）。酶活的计算公式：酶活力=（稀释倍数×OD 值）/（12100×30×V/10^ 6）(木酶ZF-2)

锰过氧化物酶锰依赖过氧化物酶(Manganese-dependent per-oxidases, MnPs):反应体系中含50 mmol/L （0.219mol/L）pH4.5的乳酸钠缓冲液3.4 mL,1.6 mmol/L的硫酸锰溶液0.1 mL,粗酶液0.4mL。37℃水浴两分钟后加入1.6 mmol/L的H2O20.1 mL,启动反应.室温下240 nm处测反应4 min时OD改变值.酶活定义为: 1个酶活力单位用每分钟吸光值增加0.1的酶量来表示。。（梁振普加邱爱连）

木素过氧化物酶：以LiP在H2O2存在下氧化Azure B染料来表示LiP活力的方法125 mmol/L（100mol/L柠檬酸缓冲液）的酒石酸钠缓冲液（pH 3.0）1 mL，0.160 mmol/L的Azure B溶液500μL，培养基滤出液500μL，30℃下加入2 mmol/L的H2O2溶液500μL启动反应，测反应最初3 min内651 nm处OD值减小速率，1个酶活力单位以每分钟每毫升的培养基滤出液降低0.1个OD值来表示。
各位虫友，最近在做木质素酶的酶活测定，遇到一些麻烦呀。以以上的方法。在漆酶测定中的465nm的测定是愈创木酚的吸收波长还是一它为底物产物的吸收波长
锰过氧化物酶：240nm二价锰离子的吸收波长还是其产物的吸收波长
木素过氧化物酶：651nm甲苯胺蓝的的吸收波长还是其产物的吸收波长
感谢你的赐教
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1楼2012-03-16 13:33:45
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云琪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ly767663894 at 2012-03-17 09:31:36:
LiP酶是底物浓度的降低，MnP酶是产物浓度的增加，Lac酶一般都是采用ABTS做的

感谢了！你的回复给予我很大的帮助。请问你：你在做Lip、Mnp的时候药品中是不是有一些需要现配的呀？你能教导怎样配置50mmol/L的乳酸缓冲液、125mmol/lL的柠檬酸缓冲液嘛？
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4楼2012-03-19 07:02:54
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ly767663894

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
LiP酶是底物浓度的降低，MnP酶是产物浓度的增加，Lac酶一般都是采用ABTS做的
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2楼2012-03-17 09:31:36
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lmy0459

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据我以前实验的经验，应该是产物的。
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3楼2012-03-18 20:36:01
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ly767663894

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

硫酸锰和ABTS需要放入棕色瓶中，避光，放入冰箱，可以用好多次。柠檬酸缓冲液是用柠檬酸和柠檬酸钠配的，称取柠檬酸5.25g，溶解定容至250ml，称取柠檬酸钠7.35g，溶解定容至250ml，按一定比例（用pH计显示为5.00）倒入一个烧杯中，转移至锥形瓶，用保鲜膜封口，放入冰箱，乳酸缓冲液也是如此。
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5楼2012-03-19 09:34:39
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ly767663894

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我配的柠檬酸是100mmol/L的，你照这个方法自己算吧！
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6楼2012-03-19 09:37:24
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云琪

新虫 (小有名气)
感谢你们的好心好新回复！请问你们做的 Lac 的OD值增加是不是很少呀！愈创木酚需要现配嘛？你们对于以上的方法是否都有尝试，有更好的建议请转告我！感谢你的恩泽，邮箱：ambitiousmaster@126.com
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7楼2012-03-24 16:10:50
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云琪

新虫 (小有名气)
你们在培养基的优化中用没有用到吐温80，是不是会沉淀呀？我做的怎么会有沉淀？和温度有关嘛？
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8楼2012-04-05 00:30:35
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1509118638

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

内容已删除
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9楼2012-08-10 17:25:25
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Alex_Feng

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，请教一下，我再测着三个酶组分的时候是用什么作为空白样调零呢？我现在在做这几个酶活的测定，但是数据不对，调零使用蒸馏水，还是灭活的酶液啊？谢谢~
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10楼2013-03-28 17:50:48
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