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云琪新虫 (小有名气)
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光吸收值是产物的还是底物的
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漆酶:5 mL 反应体系中，加入 3.6 mL（0.219mol/L） pH4.5 醋酸缓冲液，400 μL 0.01 mmol/L 愈创木酚，1 mL 粗酶液，充分混匀后，30℃准确反应 30 min，冰浴终止反应，立即在 465 nm 处比色，测定反应30 min 内酶活的变化，以热灭活酶液做对照。每分钟每 μmol 愈创木酚被氧化所需的酶量为一个活力单位（U）。酶活的计算公式：酶活力=（稀释倍数×OD 值）/（12100×30×V/10^ 6）(木酶ZF-2) 锰过氧化物酶锰依赖过氧化物酶(Manganese-dependent per-oxidases, MnPs):反应体系中含50 mmol/L （0.219mol/L）pH4.5的乳酸钠缓冲液3.4 mL,1.6 mmol/L的硫酸锰溶液0.1 mL,粗酶液0.4mL。37℃水浴两分钟后加入1.6 mmol/L的H2O20.1 mL,启动反应.室温下240 nm处测反应4 min时OD改变值.酶活定义为: 1个酶活力单位用每分钟吸光值增加0.1的酶量来表示。。（梁振普加邱爱连） 木素过氧化物酶：以LiP在H2O2存在下氧化Azure B染料来表示LiP活力的方法125 mmol/L（100mol/L柠檬酸缓冲液）的酒石酸钠缓冲液（pH 3.0）1 mL，0.160 mmol/L的Azure B溶液500μL，培养基滤出液500μL，30℃下加入2 mmol/L的H2O2溶液500μL启动反应，测反应最初3 min内651 nm处OD值减小速率，1个酶活力单位以每分钟每毫升的培养基滤出液降低0.1个OD值来表示。 各位虫友，最近在做木质素酶的酶活测定，遇到一些麻烦呀。以以上的方法。在漆酶测定中的465nm的测定是愈创木酚的吸收波长还是一它为底物产物的吸收波长 锰过氧化物酶：240nm二价锰离子的吸收波长还是其产物的吸收波长 木素过氧化物酶：651nm甲苯胺蓝的的吸收波长还是其产物的吸收波长 感谢你的赐教 |
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云琪
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| 感谢你们的好心好新回复！请问你们做的 Lac 的OD值增加是不是很少呀！愈创木酚需要现配嘛？你们对于以上的方法是否都有尝试，有更好的建议请转告我！感谢你的恩泽，邮箱：ambitiousmaster@126.com |
7楼2012-03-24 16:10:50
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