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laiyin_111木虫 (正式写手)
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【求助】求助：乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题 已有8人参与
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文献上说来自电鳗的乙酰胆碱酯酶AChE (lyophilised powder; 292 U/mg solid; 394 U/mg protein)，请问它的单位是什么意思啊？ 还有就是我如果购买500U/mg 的酶（或者是2000U/ mg) ，那么如何将它配制成1000U/mL的溶液呢？是直接用去离子水溶解还是其他什么缓冲液啊？ 一般酶溶液制备后能存放多久呢？ |
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 乙酰胆碱酯酶 |
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laiyin_111
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10 U/mL储备液：将500 U/mg的AChE灰白色固体粉末用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得； 0.22 U/mL工作液：取220 μL的10 U/mL储备液，用缓冲液B溶解，定容至10 mL量瓶中，摇匀即得。 其中，缓冲液A：50 mM Tris-HCl，pH 8.0； 称取3.03 g Tris，精密称定，加入到375 mL去离子水中，在电磁搅拌下滴加浓盐酸至pH 8.0 (25℃)，再向其中加入去离子水，定容至500 mL量瓶中，即得。 缓冲液B：50 mM Tris-HCl，pH 8.0，含有0.1%（w/v）牛血清白蛋白（BSA），用来稳定酶； 称取0.05 g BSA，精密称定后用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得（注意BSA容易产生气泡，所以定容时不要剧烈振摇，要轻轻操作，防止产生气泡）。 |
9楼2013-04-24 21:14:24
laiyin_111
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3楼2010-10-17 21:56:31
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4楼2010-10-17 22:00:24
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-12-12 18:35:08
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第一个问题在网络或课本上很容易查到，以后不许偷懒啊，呵呵。U----酶活力的度量单位。1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。 第二个问题，U/mg是用来计算你买的酶的量，你要是用2000U/mg的酶配1000U/mL的溶液，就用2000U/mg乘以酶的质量（说明书上有）再除以1000U/mL，就算出体积了。一般用PBS缓冲溶液，可能也有用其他的。pH中性左右，配完后冷冻保存，用的话，拿出一些于4摄氏度保存，尽量快点用，放置时间不宜过长。几个月是没问题的。 |
5楼2010-12-12 09:56:37
