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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 植保 » 乙酰胆碱酯酶活力测定中的问题
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child2012

新虫 (小有名气)

[求助] 乙酰胆碱酯酶活力测定中的问题

关于乙酰胆碱酯酶活力的测定，都是采用Ellman（1961）法，有3个不明白的地方请教：1可是有的人做时 用谷胱甘肽，有的人做却没有用，据原理来看，谷胱甘肽根本没有起作用，那么到底需要还是不需要呢？
2 在测定步骤的表格中，需加入 Asch-DTNB(1:2)  这个是自己配制的混合溶液吗？
3 从哪里能买到 毒扁碱？

请懂得一定回答，我着急的心情，你懂得。
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changemyself,changelife.
1楼 2013-05-10 11:38:29
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ckgzp

金虫 (初入文坛)
1、2两个问题我不清楚，因为没做过这个实验，但是毒扁豆碱我以前用过知道哪里有卖。广州科因生物公司可以卖，20mg要 398元，电话15817051471
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开心每一天，奋斗每一天！
2楼2013-05-10 16:56:02
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panyiou88

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
child2012: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-14 17:34:05
1.做乙酰胆碱酯酶不需要谷胱甘肽。谷胱甘肽是测谷胱甘肽-S-转移酶的；
2.测乙酰胆碱酯酶活性，要先加入底物，即硫代乙酰胆碱（ASch），反应完后加入染色剂DTNB，会生成蓝色的沉淀，在412nm处测OD值。
3.毒扁豆碱（eserine）在sigma公司就有卖的。
你应该了解下乙酰胆碱酯酶的基本知识，和测定的反应原理就知道了。
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3楼2013-05-13 21:25:06
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scro

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
child2012: 金币+5, ★★★很有帮助, xiexie 2013-05-14 17:33:54
1.还原型谷胱甘肽是用来作AchE酶比活力的标准曲线。在测定体系中，是用不到的。
以下是测定体系中用的药剂。
2.Asch-DTNB，是作为底物与显示剂。
3.毒扁碱是用来终止反应的。

用分光光度计的方法，以上是。非常麻烦
得出的是OD值，用OD值再用标准曲线转换，才能得到酶活。
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解惑
4楼2013-05-14 12:41:09
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satear

新虫 (初入文坛)
我想问一下怎么测定游离乙酰胆碱酯酶的活性，具体方案是怎样的？谢谢
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5楼2015-03-18 12:14:03
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谷云飞

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyiou88 at 2013-05-13 23:25:06
1.做乙酰胆碱酯酶不需要谷胱甘肽。谷胱甘肽是测谷胱甘肽-S-转移酶的；
2.测乙酰胆碱酯酶活性，要先加入底物，即硫代乙酰胆碱（ASch），反应完后加入染色剂DTNB，会生成蓝色的沉淀，在412nm处测OD值。
3.毒扁豆碱（ ...

楼主确定是蓝色沉淀吗？ 为什么我们做的都是淡黄色呢？显色剂就是淡黄色的呀
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Stay hungry,Stay foolish
6楼2021-07-25 09:50:57
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