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child2012

新虫 (小有名气)

[求助] 乙酰胆碱酯酶活力测定中的问题

关于乙酰胆碱酯酶活力的测定,都是采用Ellman(1961)法,有3个不明白的地方请教:1可是有的人做时 用谷胱甘肽,有的人做却没有用,据原理来看,谷胱甘肽根本没有起作用,那么到底需要还是不需要呢?
2 在测定步骤的表格中,需加入 Asch-DTNB(1:2)  这个是自己配制的混合溶液吗?
3 从哪里能买到 毒扁碱?

请懂得一定回答,我着急的心情,你懂得。
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changemyself,changelife.
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scro

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
child2012: 金币+5, ★★★很有帮助, xiexie 2013-05-14 17:33:54
1.还原型谷胱甘肽是用来作AchE酶比活力的标准曲线。在测定体系中,是用不到的。
以下是测定体系中用的药剂。
2.Asch-DTNB,是作为底物与显示剂。
3.毒扁碱是用来终止反应的。

用分光光度计的方法,以上是。非常麻烦
得出的是OD值,用OD值再用标准曲线转换,才能得到酶活。
解惑
4楼2013-05-14 12:41:09
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ckgzp

金虫 (初入文坛)

1、2两个问题我不清楚,因为没做过这个实验,但是毒扁豆碱我以前用过知道哪里有卖。广州科因生物公司可以卖,20mg要 398元,电话15817051471
开心每一天,奋斗每一天!
2楼2013-05-10 16:56:02
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panyiou88

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
child2012: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-14 17:34:05
1.做乙酰胆碱酯酶不需要谷胱甘肽。谷胱甘肽是测谷胱甘肽-S-转移酶的;
2.测乙酰胆碱酯酶活性,要先加入底物,即硫代乙酰胆碱(ASch),反应完后加入染色剂DTNB,会生成蓝色的沉淀,在412nm处测OD值。
3.毒扁豆碱(eserine)在sigma公司就有卖的。
你应该了解下乙酰胆碱酯酶的基本知识,和测定的反应原理就知道了。
3楼2013-05-13 21:25:06
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satear

新虫 (初入文坛)

我想问一下怎么测定游离乙酰胆碱酯酶的活性,具体方案是怎样的?谢谢
5楼2015-03-18 12:14:03
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