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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

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[求助] DTNB怎么溶解已有1人参与

试了pH7.4的PBS溶解，效果不行，仍然有粉末状，感觉就没溶解。请教各位虫子们，用什么溶剂可以使DTNB更快的溶解，或者溶解DTNB关键是什么，是pH吗？非常感谢，急急急！

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1楼 2015-04-25 10:06:44

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1012203014

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 山凝冰 at 2015-05-14 10:49:05
将3.7mgEDTA溶解在pH7.8的磷酸缓冲溶液中，定容至100mL，用此溶液可以溶解，我正在做这方面的工作

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂（DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法
美女如能解答我的问题，必当重谢！！