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lp_0820

木虫 (著名写手)

[求助] 还原性谷胱甘肽含量的测定

我查了很多的文献,在测定还原性GSH的时候第一步先是加入GR测定总的GSH(GSH+GSSG),然后在加入2-VP测定氧化态的GSH(GSSG)。然后通过两者之差计算出还原性的GSH含量。
我想问的是:是不是在第一步中不加入GR,直接测定出来的就是还原性的GSH呢?
如果不是,原因是什么?
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starseacow

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【答案】应助回帖

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lp_0820(xy656691代发): 金币+2, 感谢 2013-11-21 19:03:53
lp_0820: 金币+5 2013-11-21 21:42:26
不加入GR,无法测出还原性GSH。试剂盒如果用GSH于DTNB反应测定,则整个反应体系是处于循环状态的,GSH与GSSG相互转化。只有在NADPH和GR存在条件下,GSH+GSSG总量为一个定值,此时,通过与DTNB反应,GSSG转化为GSH,逐步消耗NADPH,TNB量逐步增加,通过记录412 nm吸光度可以获得总GSH+GSSG量。之后,通过特定试剂处理测定GSSG含量,两个值相减获得GSH量。关于这个反应的原理我记得不是很清楚了,可能描述有误,希望懂行的虫友指正。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-11-19 03:23:14
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lp_0820

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-11-19 03:23:14
不加入GR,无法测出还原性GSH。试剂盒如果用GSH于DTNB反应测定,则整个反应体系是处于循环状态的,GSH与GSSG相互转化。只有在NADPH和GR存在条件下,GSH+GSSG总量为一个定值,此时,通过与DTNB反应,GSSG转化为GSH, ...

这个计算方法我知道。我就是想知道为什么不加入GR是不可以的。植物生理学指导书上的方法就是直接测定的还原性的GSH。
3楼2013-11-21 13:37:42
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lp_0820 at 2013-11-21 13:37:42
这个计算方法我知道。我就是想知道为什么不加入GR是不可以的。植物生理学指导书上的方法就是直接测定的还原性的GSH。...

如果你有纯化并稳定的GSH,可以这么测,但在正常生物体内,同时存在GSH与GSSG平衡体系,当你通过反应测定时,GSSG也在不断转化为GSH,同时由于没有GR保证GSSG+GSH总量恒定,那么你测定的就即不是GSH的量,也不是两者总量。这是我对这个反应体系的理解。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2013-11-21 19:54:34
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