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求谷胱甘肽还原酶活性和还原型谷胱甘肽含量的测定方法 已有5人参与
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求关于植物样品（植物叶片）谷胱甘肽还原酶（GR）活性和还原型谷胱甘肽含量的测定方法，越详细越好！ 请高人指点 [ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:08 ] |
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 Biological |
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HarveyWang
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LZ表扬我吧，具体的操作和测定曲线都有了！ 谷胱甘肽还原酶测定 根据Spooner 测定[18]谷胱甘肽还原酶（GR，glutathione reductase）的方法，测定NADPH 在340 nm 的变化值, 反应如下： 操作程序如下： Pipette successively into the cuvette Stocks Concentration in assay mixture Tris-HCl MgCl2 500 μL 100 mmol/L, pH7.5 10 mmol/L 50 mmol/L, pH7.5 5 mmol/L GSH 100 μL 10 mmol/L 1 mmol/L Cell extracts 0/10/20/50/100μL H2O 350/340/300/250 μL Stay for 5 min at 37℃, reset using water as blank, then mix thoroughly with NADPH 50 μL 4 mmol/L，pH9.2 0.20 mmol/L In 10 sec start monitoring A340 for 120 sec. Determine enzymatic activity from the linear drop. 按以上测定程序进行操作，测试0，10，20，50 和100μL 的反应历程，如图4.3A 所示。发现在开始的90 sec 内反应曲线有较好的线性，以后反应速率逐渐降低，一般采用前10-70 sec (当ΔA340/min 大于0.3 时，采用10-40 sec)的反应速率。按以上测定程序进行操作，测试0, 10，20, 50 和100 μL 的酶液反应线性，以10-70 sec 的反应吸光值变化作图，发现在反应液的ΔA340/min< 0.65 时，求酶活性有较好的线性，如图4.3B 所示。 [ Last edited by HarveyWang on 2009-6-23 at 21:36 ] |
4楼2009-06-23 21:31:16
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