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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求谷胱甘肽还原酶活性和还原型谷胱甘肽含量的测定方法
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萍水相逢8963

金虫 (初入文坛)

[交流] 求谷胱甘肽还原酶活性和还原型谷胱甘肽含量的测定方法 已有5人参与

求关于植物样品（植物叶片）谷胱甘肽还原酶（GR）活性和还原型谷胱甘肽含量的测定方法，越详细越好！ 请高人指点

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:08 ]
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1楼 2009-06-20 21:34:53
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ljhzw8973

木虫 (正式写手)
呵呵，有启发，高手
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7楼2011-01-15 10:22:44
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小太阳3369

木虫 (著名写手)

悠悠我心
看看哦

[ Last edited by 小太阳3369 on 2009-6-24 at 15:12 ]
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(*^__^*)嘻嘻……
2楼2009-06-23 17:25:36
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oilseed6059

银虫 (小有名气)
这2个指标我都测过，推荐《植物生理学实验指导》，这本书两个方法都有，具体的电子版我没有
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小瓜花
3楼2009-06-23 21:24:28
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
萍水相逢8963(金币+10,VIP+0):多谢了 6-25 23:13
LZ表扬我吧，具体的操作和测定曲线都有了！


谷胱甘肽还原酶测定
根据Spooner 测定[18]谷胱甘肽还原酶（GR，glutathione reductase）的方法，测定NADPH 在340 nm 的变化值, 反应如下：

操作程序如下：
Pipette successively into the cuvette Stocks Concentration in assay mixture
Tris-HCl
MgCl2
500 μL
100 mmol/L, pH7.5
10 mmol/L
50 mmol/L, pH7.5
5 mmol/L
GSH 100 μL 10 mmol/L 1 mmol/L
Cell extracts 0/10/20/50/100μL
H2O 350/340/300/250 μL
Stay for 5 min at 37℃, reset using water as blank, then mix thoroughly with
NADPH 50 μL 4 mmol/L，pH9.2 0.20 mmol/L
In 10 sec start monitoring A340 for 120 sec. Determine enzymatic activity from the linear drop.
按以上测定程序进行操作，测试0，10，20，50 和100μL 的反应历程，如图4.3A
所示。发现在开始的90 sec 内反应曲线有较好的线性，以后反应速率逐渐降低，一般采用前10-70 sec (当ΔA340/min 大于0.3 时，采用10-40 sec)的反应速率。按以上测定程序进行操作，测试0, 10，20, 50 和100 μL 的酶液反应线性，以10-70 sec 的反应吸光值变化作图，发现在反应液的ΔA340/min< 0.65 时，求酶活性有较好的线性，如图4.3B 所示。

[ Last edited by HarveyWang on 2009-6-23 at 21:36 ]
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-06-23 21:31:16
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