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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 还原性谷胱甘肽含量的测定
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lp_0820

木虫 (著名写手)

[求助] 还原性谷胱甘肽含量的测定

我查了很多的文献，在测定还原性GSH的时候第一步先是加入GR测定总的GSH(GSH+GSSG)，然后在加入2-VP测定氧化态的GSH（GSSG）。然后通过两者之差计算出还原性的GSH含量。
我想问的是：是不是在第一步中不加入GR，直接测定出来的就是还原性的GSH呢？
如果不是，原因是什么？
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1楼 2013-11-17 21:14:58
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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lp_0820(xy656691代发): 金币+2, 感谢 2013-11-21 19:03:53
lp_0820: 金币+5 2013-11-21 21:42:26
不加入GR，无法测出还原性GSH。试剂盒如果用GSH于DTNB反应测定，则整个反应体系是处于循环状态的，GSH与GSSG相互转化。只有在NADPH和GR存在条件下，GSH+GSSG总量为一个定值，此时，通过与DTNB反应，GSSG转化为GSH，逐步消耗NADPH，TNB量逐步增加，通过记录412 nm吸光度可以获得总GSH+GSSG量。之后，通过特定试剂处理测定GSSG含量，两个值相减获得GSH量。关于这个反应的原理我记得不是很清楚了，可能描述有误，希望懂行的虫友指正。
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2楼2013-11-19 03:23:14
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lp_0820

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-11-19 03:23:14
不加入GR，无法测出还原性GSH。试剂盒如果用GSH于DTNB反应测定，则整个反应体系是处于循环状态的，GSH与GSSG相互转化。只有在NADPH和GR存在条件下，GSH+GSSG总量为一个定值，此时，通过与DTNB反应，GSSG转化为GSH， ...

这个计算方法我知道。我就是想知道为什么不加入GR是不可以的。植物生理学指导书上的方法就是直接测定的还原性的GSH。
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3楼2013-11-21 13:37:42
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lp_0820 at 2013-11-21 13:37:42
这个计算方法我知道。我就是想知道为什么不加入GR是不可以的。植物生理学指导书上的方法就是直接测定的还原性的GSH。...

如果你有纯化并稳定的GSH，可以这么测，但在正常生物体内，同时存在GSH与GSSG平衡体系，当你通过反应测定时，GSSG也在不断转化为GSH，同时由于没有GR保证GSSG+GSH总量恒定，那么你测定的就即不是GSH的量，也不是两者总量。这是我对这个反应体系的理解。
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4楼2013-11-21 19:54:34
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