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上官冰萌

新虫 (小有名气)

[求助] 有测定植物过氧化氢和超氧阴离子的方法吗已有2人参与

有测定植物过氧化氢和超氧阴离子的方法吗？表曲怎么做？感觉加入的量太少，误差太大，导致实验一直失败
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1楼2015-04-20 13:07:19
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starseacow

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【答案】应助回帖

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上官冰萌: 金币+3 2015-04-22 20:24:00
过氧化氢用IK法吧，不难做
称取样品0.500 g，在5 ml 0.1%（w/v）三氯乙酸中冰浴研磨，匀浆在4℃下12000 r/min离心15 min。取上清液0.5 ml，与0.5 ml 0.1 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液、1 ml 1 mol/l KI溶液混合，于室温黑暗下静置1 h后，测定390 nm处吸光度。H2O2含量通过标准曲线计算。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2015-04-20 21:46:43
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kethelin

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 上官冰萌 at 2015-04-22 13:59:25
谢谢了，你那边有没有详细的实验方法吗，各种找不到方法，所以不知道怎么做...

O2-产生速率测定采用王爱国，罗广华（王爱国，罗广华．植物的超氧物自由基与羟胺反应的定量关系．植物生理学通讯，1990，(6)：55～57．）的方法，取酶提取液 lml加入 lml 65mmol／L PBS-Na(pH7．8)和 1ml l0mmol／L羟氨氯化物混匀后，25℃水浴1h，取 1ml混合液加入17mmol／L的对氨基苯磺酸1ml、7mmol／L的α-萘氨 lml，25℃水浴20min，加入3ml乙醚，混匀离心(7000g，3min)取下层液相在 530nm 比色测吸光值。（酶液的量要根据具体的试验对象和处理情况灵活调整，可先做预实验）
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7楼2015-04-22 14:07:03
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kethelin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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上官冰萌: 金币+2 2015-04-22 13:58:06
过氧化氢好像不太好测。超氧阴离子我当时参考的是王爱国、罗广华的方法，
标准曲线的制备：取亚硝酸钠6.9 g定容至100 ml，为0.1 mol/L亚硝酸钠溶液，分别取2.5、5、7.5、10、12.5 ml定容至50 ml，制成5、10、15、20、25 mmol/L的标准溶液。取各标准溶液各1 mL，重复以上测定的步骤，于波长530 nm测定OD值，以OD值为纵坐标，亚硝酸钠浓度（mmol/L）为横坐标绘制标准曲线。
不懂楼主说的量太少指的是什么？样品吗？如果是样品感觉太少，可以逐渐加量，反复试验。
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2楼2015-04-20 14:47:22
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上官冰萌

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by kethelin at 2015-04-20 14:47:22
过氧化氢好像不太好测。超氧阴离子我当时参考的是王爱国、罗广华的方法，
标准曲线的制备：取亚硝酸钠6.9 g定容至100 ml，为0.1 mol/L亚硝酸钠溶液，分别取2.5、5、7.5、10、12.5 ml定容至50 ml，制成5、10、15、2 ...

谢谢了，你那边有没有详细的实验方法吗，各种找不到方法，所以不知道怎么做
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4楼2015-04-22 13:59:25
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上官冰萌

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kethelin at 2015-04-20 14:47:22
过氧化氢好像不太好测。超氧阴离子我当时参考的是王爱国、罗广华的方法，
标准曲线的制备：取亚硝酸钠6.9 g定容至100 ml，为0.1 mol/L亚硝酸钠溶液，分别取2.5、5、7.5、10、12.5 ml定容至50 ml，制成5、10、15、2 ...

我找到的方法，标曲特别难做，是微克每升，所以不会做
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5楼2015-04-22 14:01:03
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上官冰萌

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by starseacow at 2015-04-20 21:46:43
过氧化氢用IK法吧，不难做
称取样品0.500 g，在5 ml 0.1%（w/v）三氯乙酸中冰浴研磨，匀浆在4℃下12000 r/min离心15 min。取上清液0.5 ml，与0.5 ml 0.1 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液、1 ml 1 mol/l KI溶液混合，于室 ...

那h2o2的标曲制作方法，你那边有吗，碘化钾法没有尝试过，你那边有没有详细地实验方法
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6楼2015-04-22 14:03:11
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上官冰萌

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by kethelin at 2015-04-22 14:07:03
O2-产生速率测定采用王爱国，罗广华（王爱国，罗广华．植物的超氧物自由基与羟胺反应的定量关系．植物生理学通讯，1990，(6)：55～57．）的方法，取酶提取液 lml加入 lml 65mmol／L PBS-Na(pH7．8)和 1ml l0mmol／ ...

对氨基苯磺酸和α-萘氨应该用什么溶解呢，我看到有些文献上面是3：1的醋酸水溶液，有些是1：3，还有些讲的是α-萘氨用乙醇溶解再定容，结果有很多絮状物，
还有就是测到吸光度后怎么与超氧阴离子浓度换算呢，可能表达的比较混乱，嘻嘻
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8楼2015-04-22 20:23:50
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kethelin

金虫 (小有名气)
不是已经把超养阴离子的测定方法发给你了吗？
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9楼2015-04-23 09:31:08
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kethelin

金虫 (小有名气)
O2-产生速率测定采用王爱国，罗广华（王爱国，罗广华．植物的超氧物自由基与羟胺反应的定量关系．植物生理学通讯，1990，(6)：55～57．）的方法，取酶提取液 lml加入 lml 65mmol／L PBS-Na(pH7．8)和 1ml l0mmol／L羟氨氯化物混匀后，25℃水浴1h，取 1ml混合液加入17mmol／L的对氨基苯磺酸1ml、7mmol／L的α-萘氨 lml，25℃水浴20min，加入3ml乙醚，混匀离心(7000g，3min)取下层液相在 530nm 比色测吸光值。（酶液的量要根据具体的试验对象和处理情况灵活调整，可先做预实验）
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10楼2015-04-23 09:33:48
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