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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 急求聚丙烯酰胺凝胶电泳点样点不进胶孔是怎么回事？？？
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棉花糖WY

金虫 (小有名气)

[求助] 急求聚丙烯酰胺凝胶电泳点样点不进胶孔是怎么回事？？？已有3人参与

急求聚丙烯酰胺凝胶电泳点样点不进胶孔是怎么回事？？？其中mark蛋白和其他样品都可以点进去，只有nisin的标品点不进去，总是往上飘，是点样的时候就往上飘是怎么回事？？？急求大神回复，谢谢。。。
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1楼2015-04-16 21:53:31
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亲叫我石头

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 棉花糖WY at 2015-04-17 22:39:06
我直接用无菌水溶解的，然后放到冰箱里过夜后发现下面都是絮状物，这些絮状物是脱脂乳粉吗？？？你说用酸水溶解后再离心取上清液吗？？还有你用的是几乘的loading buffer啊？？？非常感谢...

Loading buffer 6*的…

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6楼2015-04-18 03:28:11
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朱多龙

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 棉花糖WY at 2015-04-17 22:39:06
我直接用无菌水溶解的，然后放到冰箱里过夜后发现下面都是絮状物，这些絮状物是脱脂乳粉吗？？？你说用酸水溶解后再离心取上清液吗？？还有你用的是几乘的loading buffer啊？？？非常感谢...

用0.02 M HCl 去溶解nisin. Sigma 标品里只有2.5% 是nisin, 其余都是奶粉。nisin比较容易溶于酸中，水中溶解性不好。我用的是4xloading 。
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棉花糖WY
7楼2015-04-18 15:21:36
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
缓冲液TBE重新配置  彻底滚均匀  换上

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2楼2015-04-16 22:17:35
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棉花糖WY

金虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-16 22:17:35
缓冲液TBE重新配置  彻底滚均匀  换上

我做的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，跑蛋白质的，不是TBE，其他的样品和mark蛋白都可以加到上样孔中，缓冲液也是刚刚全部配过才做的，只有nisin标品加不进去，总是往上飘，我觉得是不是标品也需要硫酸铵沉淀一下呢？？？谢谢
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3楼2015-04-17 09:48:32
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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棉花糖WY: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-04-18 15:48:31
你把Nisin标品融到酸水中后离心了吗？我做没有问题啊！你要把大部分牛奶离掉，不然加loading煮后上游会飘。
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4楼2015-04-17 19:58:13
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棉花糖WY

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 朱多龙 at 2015-04-17 19:58:13
你把Nisin标品融到酸水中后离心了吗？我做没有问题啊！你要把大部分牛奶离掉，不然加loading煮后上游会飘。

我直接用无菌水溶解的，然后放到冰箱里过夜后发现下面都是絮状物，这些絮状物是脱脂乳粉吗？？？你说用酸水溶解后再离心取上清液吗？？还有你用的是几乘的loading buffer啊？？？非常感谢
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5楼2015-04-17 22:39:06
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棉花糖WY

金虫 (小有名气)
送红花一朵
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7楼: Originally posted by 朱多龙 at 2015-04-18 15:21:36
用0.02 M HCl 去溶解nisin. Sigma 标品里只有2.5% 是nisin, 其余都是奶粉。nisin比较容易溶于酸中，水中溶解性不好。我用的是4xloading 。...

谢谢
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8楼2015-04-18 15:48:14
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棉花糖WY

金虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 亲叫我石头 at 2015-04-18 03:28:11
Loading buffer 6*的…
...

谢谢
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9楼2015-04-18 15:48:49
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棉花糖WY

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 朱多龙 at 2015-04-18 15:21:36
用0.02 M HCl 去溶解nisin. Sigma 标品里只有2.5% 是nisin, 其余都是奶粉。nisin比较容易溶于酸中，水中溶解性不好。我用的是4xloading 。...

能否把你的4Xloading的配方说一下啊？？？我查了一下，配方都不统一，谢谢。。。
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10楼2015-04-19 16:27:12
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