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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于原核生物RNA提取，最后总是有基因组残余问题，求帮助
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rescuz

金虫 (小有名气)

[求助] 关于原核生物RNA提取，最后总是有基因组残余问题，求帮助 已有1人参与

如题所示，Lz最近在进行分子实验，需要提取目的菌株的RNA作为阴性对照，用反转录得到的CDNA进行PCR,所以对RNA的纯洁度有很高要求，但是每每提取RNA接着直接以RNA为模版，用基因组的任意引物PCR都能得到较亮的目的条带,,所以肯定是有基因组污染的，LZ很困惑啊，希望大家多多赐教!!!
ps用水做了阴性对照，木有p出条带，在超净台里准备的实验。
pcr程序 primer star MAX 98度10s;55度10s;72度30s,35-40个循环，目的片段大小有500bp长短的也有1000bp左右的，所以时间设为30s.
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1楼 2015-04-14 22:14:42
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rescuz

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by clark2010 at 2015-04-15 15:57:56
那我就帮不了你了，我的经验有限...

求顶 啊
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5楼2015-04-16 11:20:47
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clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在反转录之前用DNA酶再处理一遍。然后高温（好像42度，这个不是很确定，看说明书吧）让DNA酶失活，然后再反转录
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2楼2015-04-15 00:26:44
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rescuz

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by clark2010 at 2015-04-15 00:26:44
在反转录之前用DNA酶再处理一遍。然后高温（好像42度，这个不是很确定，看说明书吧）让DNA酶失活，然后再反转录

我尝试处理过，可是最后发现还是有基因组残余啊（用引物pcr)，而且最后RNA量似乎很低了。
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3楼2015-04-15 14:34:43
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clark2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by rescuz at 2015-04-15 14:34:43
我尝试处理过，可是最后发现还是有基因组残余啊（用引物pcr)，而且最后RNA量似乎很低了。...

那我就帮不了你了，我的经验有限
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rescuz
4楼2015-04-15 15:57:56
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