24小时热门版块排行榜    

查看: 891  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

rescuz

金虫 (小有名气)

[求助] 关于原核生物RNA提取,最后总是有基因组残余问题,求帮助 已有1人参与

如题所示,Lz最近在进行分子实验,需要提取目的菌株的RNA作为阴性对照,用反转录得到的CDNA进行PCR,所以对RNA的纯洁度有很高要求,但是每每提取RNA接着直接以RNA为模版,用基因组的任意引物PCR都能得到较亮的目的条带,,所以肯定是有基因组污染的,LZ很困惑啊,希望大家多多赐教!!!
ps用水做了阴性对照,木有p出条带,在超净台里准备的实验。
pcr程序 primer star MAX 98度10s;55度10s;72度30s,35-40个循环,目的片段大小有500bp长短的也有1000bp左右的,所以时间设为30s.
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clark2010

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by rescuz at 2015-04-15 14:34:43
我尝试处理过,可是最后发现还是有基因组残余啊(用引物pcr),而且最后RNA量似乎很低了。...

那我就帮不了你了,我的经验有限

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2015-04-15 15:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在反转录之前用DNA酶再处理一遍。然后高温(好像42度,这个不是很确定,看说明书吧)让DNA酶失活,然后再反转录
2楼2015-04-15 00:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rescuz

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by clark2010 at 2015-04-15 00:26:44
在反转录之前用DNA酶再处理一遍。然后高温(好像42度,这个不是很确定,看说明书吧)让DNA酶失活,然后再反转录

我尝试处理过,可是最后发现还是有基因组残余啊(用引物pcr),而且最后RNA量似乎很低了。
3楼2015-04-15 14:34:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rescuz

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by clark2010 at 2015-04-15 15:57:56
那我就帮不了你了,我的经验有限...

求顶 啊
5楼2015-04-16 11:20:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-29 20:18 by 63GmZBFV29mG
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 17:31 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 13:51 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见