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关于原核生物RNA提取,最后总是有基因组残余问题,求帮助 已有1人参与
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如题所示,Lz最近在进行分子实验,需要提取目的菌株的RNA作为阴性对照,用反转录得到的CDNA进行PCR,所以对RNA的纯洁度有很高要求,但是每每提取RNA接着直接以RNA为模版,用基因组的任意引物PCR都能得到较亮的目的条带,,所以肯定是有基因组污染的,LZ很困惑啊,希望大家多多赐教!!! ps用水做了阴性对照,木有p出条带,在超净台里准备的实验。 pcr程序 primer star MAX 98度10s;55度10s;72度30s,35-40个循环,目的片段大小有500bp长短的也有1000bp左右的,所以时间设为30s. |
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rescuz