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Insecta_A铜虫 (小有名气)
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[交流]
关于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的问题
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我做的是6%变性PAGE电泳（尿素变性），75V 1.5h，银染显色固定后照相检测SSR引物多态性。在这过程中出现了一下几个问题，想请教各位： 1.Marker（DL500 DNA Marker）出现不准确现象，我的DNA PCR样品经过95°变性5min处理成单链后再上样，请问我的Marker需要什么特殊处理吗？或者有什么更合适变性PAGE使用的DNA Marker？ 2.染色固定后拿去伯乐的凝胶成像仪上照相，结果怎么都照不出来，请问大家照相是怎么搞的（这个感觉应该是很简单的事情吧，结果我遇到了，汗）？ 3.我做的是小板子（因为没有大板子）的胶，结果如下图，我的目的条带大约在150-210bp，我们姑且认为Marker是准的，感觉上在那附近的条带应该有4条，但是没有跑开，请问大家能不能帮忙优化条件，比如电泳的电压、时间等，或者其他什么原因？ 4.还有就是跑出来的条带为啥感觉有点拖带（上样量为 PCR产物1.5ul， loading buffer 1.5ul），请问如何解决这些问题？ 5.最后，请大家根据这张图提一些可以改进的地方（我也是第一次做PAGE，很多都不懂，希望大家能帮忙） 没有多少金币了，全散了请教  M63.jpg |
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