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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 分离胶跑的时间太长
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逸悠然

铜虫 (小有名气)

[求助] 分离胶跑的时间太长 已有1人参与

本人新手一枚，最近在做western，配了5%浓缩胶和15%分离胶，结果1、浓缩胶80V跑了半小时，而分离胶110V跑了两个半小时，这样是不是对实验结果有影响呀！！
2、buffer跑到底后，结果根据marker，我想要的15K的蛋白还没跑开，这是为什么呢？
求高手指导，感激不尽！！
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1楼 2015-04-08 14:26:44
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 逸悠然 at 2015-04-08 21:29:25
跑分离胶时间长没有问题吗？我一直以为是这个原因呢，别人貌似都跑一个小时，但我跑了两个半。还有就是PH值的影响大吗？比如说6.8、8.8配的稍微有点误差，影响大吗？我也不知道怎么回事，一开始用的别人配的，都跑 ...

影响当然大，那就是你试剂问题了，重新配胶吧
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4楼2015-04-08 21:32:48
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑胶时间上问题不是很大，关键是你说你没有跑开15kd的条带，这个很诡异！我10kd的用和你差不多的条件，分的很清楚，你确定自己marker没有认错吗？如果都OK就把自己配胶的试剂再检查一下，是不是有失效的，一般都分得开的
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2楼2015-04-08 19:47:24
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逸悠然

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-04-08 19:47:24
跑胶时间上问题不是很大，关键是你说你没有跑开15kd的条带，这个很诡异！我10kd的用和你差不多的条件，分的很清楚，你确定自己marker没有认错吗？如果都OK就把自己配胶的试剂再检查一下，是不是有失效的，一般都分得 ...

跑分离胶时间长没有问题吗？我一直以为是这个原因呢，别人貌似都跑一个小时，但我跑了两个半。还有就是PH值的影响大吗？比如说6.8、8.8配的稍微有点误差，影响大吗？我也不知道怎么回事，一开始用的别人配的，都跑出来了，结果自己配的话，就成这样，10K的那条黄色带从来没出来过！
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3楼2015-04-08 21:29:25
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逸悠然

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-04-08 21:32:48
影响当然大，那就是你试剂问题了，重新配胶吧...

我昨天又重新检测一下，PH值问题不大，但是还是那样，分离胶最后没跑开，还是跑了两个半小时，能知道具体哪里出错了吗
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5楼2015-04-10 09:11:40
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