应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » DNA聚合反应求指导
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 1021  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

justsmiling

银虫 (小有名气)

[求助] DNA聚合反应求指导 已有2人参与

分子信标跟引物在聚合酶作用下将分子信标打开，为什么我做的引物跟分子信标的荧光值只能达到分子信标跟其互补链的30%，这个跟哪些因素有关呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-07 22:06:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

anglett

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-09 22:42:41
分子探针的序列，buffer,酶的活性及浓度，底物的量反应温度和时间，这些都是会影响荧光强度的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2015-04-08 20:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anglett

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主，你的反应温度是多少，你的这两条链有点问题，你可以自己算下Tm值。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2015-04-08 21:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by justsmiling at 2015-04-08 21:18:49
MB是5’-TAMRA-CCTCTCCGTGTCTTGTACTTCCCGTCAGAGAGG-DABCYL-3’，引物链是5’-GACGGGAAG-3’ ，buf是
50mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，5mM MgCl2，250uM dNTP，酶我加终浓度为2U/100uL，MB200nM，引物300nM...

杂交和聚合的温度呢？

模拟显示在聚合酶最优工作温度37℃下这两条链的杂交比例很低。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-04-09 09:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-08 09:32:03
方便透露一下你用的链的序列吗？第一印象是你用的引物链不足以结合在分子信标上。
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-08 08:32:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by greeneese at 2015-04-08 08:32:51
方便透露一下你用的链的序列吗？第一印象是你用的引物链不足以结合在分子信标上。

我的链是以前师兄做过的，但是他能恢复到80%，我就只能到30%
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-08 10:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by justsmiling at 2015-04-08 10:57:54
我的链是以前师兄做过的，但是他能恢复到80%，我就只能到30%...

那就是不方便透露你用的链的序列喽？

很难在不知道这种信息的情况下帮你。
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-08 14:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by greeneese at 2015-04-08 14:57:11
那就是不方便透露你用的链的序列喽？

很难在不知道这种信息的情况下帮你。...

MB是5’-TAMRA-CCTCTCCGTGTCTTGTACTTCCCGTCAGAGAGG-DABCYL-3’，引物链是5’-GACGGGAAG-3’ ，buf是
50mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，5mM MgCl2，250uM dNTP，酶我加终浓度为2U/100uL,MB是200nM,引物是300nM的浓度
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-08 21:18:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by anglett at 2015-04-08 20:49:25
分子探针的序列，buffer,酶的活性及浓度，底物的量反应温度和时间，这些都是会影响荧光强度的。

MB是5’-TAMRA-CCTCTCCGTGTCTTGTACTTCCCGTCAGAGAGG-DABCYL-3’，引物链是5’-GACGGGAAG-3’ ，buf是
50mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，5mM MgCl2，250uM dNTP，酶我加终浓度为2U/100uL，MB200nM，引物300nM
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-08 21:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by anglett at 2015-04-08 21:44:40
楼主，你的反应温度是多少，你的这两条链有点问题，你可以自己算下Tm值。

反应温度是37度，这个Tm值是MB的Tm值还是杂交后的Tm值？
赞一下 回复此楼
10楼2015-04-09 12:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 justsmiling 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +5 lllllos 2026-03-30 5/250 2026-03-30 15:05 by cq2548
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 296求调剂 +10 彼岸t 2026-03-29 10/500 2026-03-30 10:50 by 探123
[考研] 0856求调剂 +8 楒桉 2026-03-28 8/400 2026-03-30 10:00 by wzy-lxz
[考研] 290求调剂 +3 dfffsar 2026-03-29 3/150 2026-03-29 22:38 by 毛毛毛阿莫2
[考研] 材料科学与工程求调剂 +6 深V宿舍吧 2026-03-29 6/300 2026-03-29 20:51 by 唐沐儿
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 085600，专业课化工原理，321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +10 y7czhao 2026-03-26 10/500 2026-03-28 14:23 by 唐沐儿
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考博] 26申博 +3 加油冲啊！ 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭