应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » DNA聚合反应求指导
121/2返回列表12下一页
查看: 1143  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

justsmiling

银虫 (小有名气)

[求助] DNA聚合反应求指导 已有2人参与

分子信标跟引物在聚合酶作用下将分子信标打开，为什么我做的引物跟分子信标的荧光值只能达到分子信标跟其互补链的30%，这个跟哪些因素有关呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-07 22:06:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

anglett

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-09 22:42:41
分子探针的序列，buffer,酶的活性及浓度，底物的量反应温度和时间，这些都是会影响荧光强度的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2015-04-08 20:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anglett

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主，你的反应温度是多少，你的这两条链有点问题，你可以自己算下Tm值。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2015-04-08 21:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by justsmiling at 2015-04-08 21:18:49
MB是5’-TAMRA-CCTCTCCGTGTCTTGTACTTCCCGTCAGAGAGG-DABCYL-3’，引物链是5’-GACGGGAAG-3’ ，buf是
50mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，5mM MgCl2，250uM dNTP，酶我加终浓度为2U/100uL，MB200nM，引物300nM...

杂交和聚合的温度呢？

模拟显示在聚合酶最优工作温度37℃下这两条链的杂交比例很低。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-04-09 09:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-08 09:32:03
方便透露一下你用的链的序列吗？第一印象是你用的引物链不足以结合在分子信标上。
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-08 08:32:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by greeneese at 2015-04-08 08:32:51
方便透露一下你用的链的序列吗？第一印象是你用的引物链不足以结合在分子信标上。

我的链是以前师兄做过的，但是他能恢复到80%，我就只能到30%
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-08 10:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by justsmiling at 2015-04-08 10:57:54
我的链是以前师兄做过的，但是他能恢复到80%，我就只能到30%...

那就是不方便透露你用的链的序列喽？

很难在不知道这种信息的情况下帮你。
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-08 14:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by greeneese at 2015-04-08 14:57:11
那就是不方便透露你用的链的序列喽？

很难在不知道这种信息的情况下帮你。...

MB是5’-TAMRA-CCTCTCCGTGTCTTGTACTTCCCGTCAGAGAGG-DABCYL-3’，引物链是5’-GACGGGAAG-3’ ，buf是
50mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，5mM MgCl2，250uM dNTP，酶我加终浓度为2U/100uL,MB是200nM,引物是300nM的浓度
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-08 21:18:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by anglett at 2015-04-08 20:49:25
分子探针的序列，buffer,酶的活性及浓度，底物的量反应温度和时间，这些都是会影响荧光强度的。

MB是5’-TAMRA-CCTCTCCGTGTCTTGTACTTCCCGTCAGAGAGG-DABCYL-3’，引物链是5’-GACGGGAAG-3’ ，buf是
50mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，5mM MgCl2，250uM dNTP，酶我加终浓度为2U/100uL，MB200nM，引物300nM
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-08 21:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsmiling

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by anglett at 2015-04-08 21:44:40
楼主，你的反应温度是多少，你的这两条链有点问题，你可以自己算下Tm值。

反应温度是37度，这个Tm值是MB的Tm值还是杂交后的Tm值？
赞一下 回复此楼
10楼2015-04-09 12:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 justsmiling 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 7/350 2026-07-31 12:10 by syhhffkrym
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 3/150 2026-07-31 12:08 by syhhffkrym
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 6/300 2026-07-31 12:05 by syhhffkrym
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +6 锦衣卫寒战 2026-07-28 6/300 2026-07-31 11:27 by syl200707
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +15 1234567wang 2026-07-25 19/950 2026-07-31 08:30 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +8 布布和一二 2026-07-30 8/400 2026-07-31 01:51 by alongwaytogo
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 17/850 2026-07-30 20:10 by kissu88
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了？ +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么？ 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 没消息就是被刷了呗 +13 lambert2014 2026-07-24 14/700 2026-07-29 10:38 by msh145800
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭