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justsmiling

银虫 (小有名气)

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[求助] DNA聚合反应求指导已有2人参与

分子信标跟引物在聚合酶作用下将分子信标打开，为什么我做的引物跟分子信标的荧光值只能达到分子信标跟其互补链的30%，这个跟哪些因素有关呢

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1楼 2015-04-07 22:06:40

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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

7楼: Originally posted by justsmiling at 2015-04-08 21:18:49
MB是5’-TAMRA-CCTCTCCGTGTCTTGTACTTCCCGTCAGAGAGG-DABCYL-3’，引物链是5’-GACGGGAAG-3’ ，buf是
50mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，5mM MgCl2，250uM dNTP，酶我加终浓度为2U/100uL，MB200nM，引物300nM...

杂交和聚合的温度呢？

模拟显示在聚合酶最优工作温度37℃下这两条链的杂交比例很低。