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hcswj

木虫 (小有名气)

[求助] 求问一种能够区分单双链DNA的试剂

不仅能区分,还要能定量,有较强的灵敏度。
例如有某种试剂,试剂本身以及在单链寡聚DNA存在下没有或者只有很弱的荧光响应,而在双链DNA存在时有较强荧光响应。
另外要求试剂不能进入肿瘤细胞内。尽量低毒,价格低。

谢谢!
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水墨丹青

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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amisking(金币+4): 鼓励发帖交流。 2011-12-19 18:22:08
hcswj(金币+4): 有帮助 谢谢! 2011-12-21 09:09:02
我知道一种染料,SYBR Green,符合你的第一个要求“试剂本身以及在单链寡聚DNA存在下没有或者只有很弱的荧光响应,而在双链DNA存在时有较强荧光响应”。我也是之前做试验的时候用到才知道这个染料的。
但是我没有做过细胞试验,不知道能不能进入细胞内。
我在网上找了一下,发现这个一般用来跑电泳,你可以参考一下:http://www.shinegene.org.cn/tools/SYBRGreenI.pdf
以上仅供参考,不足之处多多包涵^_^
2楼2011-12-19 11:08:02
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-12-19 18:22:13
hcswj(金币+4): 有帮助 谢谢! 2011-12-21 09:09:19
用sYBRgreen,EB,Gelred之类的核酸染料都可以的,就是平常核酸电泳的染料。原理是能嵌合在DNA双链中,在荧光下可以显色。定量的话也是可以的,用定量marker一起跑电泳,根据他们的亮度来估算浓度,应该还是比较准的,我们和仪器测定的比对过,差别还是很接近的。
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
3楼2011-12-19 14:38:17
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w.king124

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

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hcswj(金币+3): 有帮助 那么说来无法避免了?单链的只要不是太强就可以 2011-12-21 09:10:15
单链也会被染色的,貌似也可以形成局部发夹结构
4楼2011-12-20 08:54:27
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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hcswj(金币+4): 有帮助 敢问这是什么温度?在TM值以下吗? 2011-12-21 09:11:33
单链也有颜色,不过估计荧光较弱,具体看序列结构,不过可以在一定温度下检测,解开链链之间二级结构
5楼2011-12-20 20:49:42
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shaquila

金虫 (正式写手)

提供个参考,跑RNA和反转时候用六十五度破除二级结构和高GC模板
6楼2011-12-21 14:43:46
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