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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 蛋白诱导,之前菌种好好的,换了一批就不行了 已有2人参与

蛋白诱导,之前好好的,换了一批就不好啦,怎么解决?从-80拿出来的甘油菌直接活化接种,诱导还是没有条带,5个月前的菌种有目的条带,但是很微弱,怎么办?我是拿有一点目的条带的菌种涂平板/挑菌吗?
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踏实
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的保种菌是什么菌?以前我做蛋白表达纯化时也曾出现类似问题:原来是可溶表达,保存后活化再表达却是包涵体。给你以下几个意见:
1. 你酶切鉴定的质粒是你未表达的菌液里提出的吗?
2. 你可以再次划板,挑取阳性克隆多个鉴定后做表达试验。
3. 分析你这次的表达条件是否有所不同。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
3楼2015-04-07 10:22:42
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是菌不行了,可能是保存不当,也有可能是构建的就有问题!可以重新提质粒转化一下看看!
I am not a hero , but I served with heroes!
2楼2015-04-06 21:33:59
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-04-07 10:22:42
你的保种菌是什么菌?以前我做蛋白表达纯化时也曾出现类似问题:原来是可溶表达,保存后活化再表达却是包涵体。给你以下几个意见:
1. 你酶切鉴定的质粒是你未表达的菌液里提出的吗?
2. 你可以再次划板,挑取阳性 ...

是的,我觉得-80保存的菌种应该没问题哈,我打算送出去测序一下,看看是怎么回事
踏实
4楼2015-04-07 12:18:58
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