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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白诱导，之前菌种好好的，换了一批就不行了
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 蛋白诱导，之前菌种好好的，换了一批就不行了 已有2人参与

蛋白诱导，之前好好的，换了一批就不好啦，怎么解决？从-80拿出来的甘油菌直接活化接种，诱导还是没有条带，5个月前的菌种有目的条带，但是很微弱，怎么办？我是拿有一点目的条带的菌种涂平板/挑菌吗？
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踏实
1楼 2015-04-06 20:23:55
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是菌不行了，可能是保存不当，也有可能是构建的就有问题！可以重新提质粒转化一下看看！
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I am not a hero , but I served with heroes！
2楼2015-04-06 21:33:59
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的保种菌是什么菌？以前我做蛋白表达纯化时也曾出现类似问题：原来是可溶表达，保存后活化再表达却是包涵体。给你以下几个意见：
1. 你酶切鉴定的质粒是你未表达的菌液里提出的吗？
2. 你可以再次划板，挑取阳性克隆多个鉴定后做表达试验。
3. 分析你这次的表达条件是否有所不同。
赞一下(1人) 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-04-07 10:22:42
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-04-07 10:22:42
你的保种菌是什么菌？以前我做蛋白表达纯化时也曾出现类似问题：原来是可溶表达，保存后活化再表达却是包涵体。给你以下几个意见：
1. 你酶切鉴定的质粒是你未表达的菌液里提出的吗？
2. 你可以再次划板，挑取阳性 ...

是的，我觉得-80保存的菌种应该没问题哈，我打算送出去测序一下，看看是怎么回事
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踏实
4楼2015-04-07 12:18:58
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