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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 想要表达一个190kd大小的蛋白 该如何做到。。。
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liuxianch

新虫 (初入文坛)

[求助] 想要表达一个190kd大小的蛋白 该如何做到。。。 已有3人参与

想要表达一个190kd大小的蛋白 该如何做到。。
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1楼 2015-03-18 16:48:13
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-19 15:40:38
这么大的蛋白，在表达纯化过程中很容易降解，不容易得到全长的蛋白
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2015-03-18 20:13:30
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白真的挺大的，没做过这么大的
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3楼2015-03-18 20:29:19
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuxianch: 金币+2, ★有帮助 2015-03-19 15:11:10
试试酵母表达，我表达过260的。。。。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-19 00:00:18
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liuxianch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-19 00:00:18
试试酵母表达，我表达过260的。。。。。。

用什么载体和酵母呢， 实验室以前做原核， 没做过真核       有空的话能不能给我讲讲 谢谢哈
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5楼2015-03-19 14:26:27
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuxianch at 2015-03-19 14:26:27
用什么载体和酵母呢， 实验室以前做原核， 没做过真核       有空的话能不能给我讲讲 谢谢哈...

我用的是PPIC9的质粒，毕赤酵母。楼主可以看看（酵母表达精译版），我记得上传过。
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采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2015-03-19 15:51:14
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liuxianch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-19 15:51:14
我用的是PPIC9的质粒，毕赤酵母。楼主可以看看（酵母表达精译版），我记得上传过。...

谢谢啊
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7楼2015-03-19 18:07:31
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wanglele87

金虫 (著名写手)
你要真核表达还是原核表达？

[ 发自小木虫客户端 ]
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一生不羁放纵爱自由
8楼2015-03-19 18:52:46
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liuxianch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-03-19 18:52:46
你要真核表达还是原核表达？

原核表达很少，而且做活性没做出来 用Pet32a
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9楼2015-03-27 14:52:38
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wanglele87

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liuxianch at 2015-03-27 14:52:38
原核表达很少，而且做活性没做出来 用Pet32a...

原核的话比较难吧。看运气了。试试大标签。如果需要的量比较少的话，可以考虑用哺乳细胞表达的试试。如果需要的量比较多的话，就试酵母和或者昆虫吧。上面那个哥们说的酵母PPic9K那个质粒是分泌表达的。
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一生不羁放纵爱自由
10楼2015-03-27 17:30:13
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