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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请大家帮忙,多次提取细菌基因组未能成功,麻烦各位指教一下 已有2人参与

大家好,未知革兰氏阳性菌,用生工柱式提取试剂盒提取多次未能成功,隔夜培养菌株1-1.5ml,中间裂解时发现长时间裂解液都不变澄清,其他步骤按试剂盒步骤提取,多次未能成功,请各位指教,谢谢
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wanglei512

金虫 (正式写手)

OMEGA  细菌基因组提取试剂盒   效果非常好    如果这个也不行  你的是不是细菌
8楼2015-03-14 16:33:54
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bainaling

铁杆木虫 (正式写手)

要不就反复冻融外加溶菌酶试试呢
9楼2015-03-15 14:25:08
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普通回帖

clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2015-03-13 08:35:25
yingzhu1114: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-03-14 09:44:11
试剂盒是针对革兰氏阳性菌的嘛?如果不是的话,提取之前加溶菌酶处理一下。如果是,就延长溶菌酶处理时间试试。
2楼2015-03-12 18:36:56
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tomjena2015

新虫 (初入文坛)

请问您提取DNA 是用来作PCR的模板吗?
3楼2015-03-13 00:31:56
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yingzhu1114: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-03-14 09:47:09
用其他方法裂解试试,超声,bead beating 等等
4楼2015-03-13 00:49:59
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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by clark2010 at 2015-03-12 18:36:56
试剂盒是针对革兰氏阳性菌的嘛?如果不是的话,提取之前加溶菌酶处理一下。如果是,就延长溶菌酶处理时间试试。

谢谢,是阳性菌,溶解时间延长半个多小时,情况也不乐观,不知什么原因?
5楼2015-03-14 09:43:42
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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tomjena2015 at 2015-03-13 00:31:56
请问您提取DNA 是用来作PCR的模板吗?

是的,用来扩16S,做菌株鉴定的
6楼2015-03-14 09:44:59
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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by eagles123 at 2015-03-13 00:49:59
用其他方法裂解试试,超声,bead beating 等等

谢谢,请问加入裂解液可以超声,bead beating 吗?对DNA没有影响吗?
7楼2015-03-14 09:46:14
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quiller2000

木虫 (著名写手)

Fastprep

做PCR,那就是分分钟就好,没有那么复杂,我还以为是整三代测序呢
致良知
10楼2015-03-16 21:13:43
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