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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 请大家帮忙，多次提取细菌基因组未能成功，麻烦各位指教一下
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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请大家帮忙，多次提取细菌基因组未能成功，麻烦各位指教一下 已有2人参与

大家好，未知革兰氏阳性菌，用生工柱式提取试剂盒提取多次未能成功，隔夜培养菌株1-1.5ml，中间裂解时发现长时间裂解液都不变澄清，其他步骤按试剂盒步骤提取，多次未能成功，请各位指教，谢谢
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1楼 2015-03-12 16:19:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanglei512

金虫 (正式写手)
OMEGA  细菌基因组提取试剂盒   效果非常好    如果这个也不行  你的是不是细菌
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8楼2015-03-14 16:33:54
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bainaling

铁杆木虫 (正式写手)
要不就反复冻融外加溶菌酶试试呢
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9楼2015-03-15 14:25:08
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普通回帖

clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2015-03-13 08:35:25
yingzhu1114: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-03-14 09:44:11
试剂盒是针对革兰氏阳性菌的嘛？如果不是的话，提取之前加溶菌酶处理一下。如果是，就延长溶菌酶处理时间试试。
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2楼2015-03-12 18:36:56
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tomjena2015

新虫 (初入文坛)
请问您提取DNA 是用来作PCR的模板吗?
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3楼2015-03-13 00:31:56
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yingzhu1114: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-03-14 09:47:09
用其他方法裂解试试，超声，bead beating 等等
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4楼2015-03-13 00:49:59
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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by clark2010 at 2015-03-12 18:36:56
试剂盒是针对革兰氏阳性菌的嘛？如果不是的话，提取之前加溶菌酶处理一下。如果是，就延长溶菌酶处理时间试试。

谢谢，是阳性菌，溶解时间延长半个多小时，情况也不乐观，不知什么原因？
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5楼2015-03-14 09:43:42
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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tomjena2015 at 2015-03-13 00:31:56
请问您提取DNA 是用来作PCR的模板吗?

是的，用来扩16S,做菌株鉴定的
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6楼2015-03-14 09:44:59
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yingzhu1114

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by eagles123 at 2015-03-13 00:49:59
用其他方法裂解试试，超声，bead beating 等等

谢谢，请问加入裂解液可以超声，bead beating 吗？对DNA没有影响吗？
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7楼2015-03-14 09:46:14
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quiller2000

木虫 (著名写手)
Fastprep

做PCR，那就是分分钟就好，没有那么复杂，我还以为是整三代测序呢
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致良知
10楼2015-03-16 21:13:43
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