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zeroon木虫 (正式写手)
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关于细胞内蛋白定位的问题，和融合蛋白表达的问题，融合PCR问题已有1人参与
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背景： 现在有大约4500 bp大小的一个基因，其表达的蛋白需要在细胞内定位，初步的研究方案是在体外设计融合蛋白表达载体。即先在体外扩增该基因和绿色荧光蛋白gfp基因，然后采用融合PCR的方式将这两段基因融合在一起。当然还要在后面加抗性筛选标记。最后通过同源双交换定点整合到原来该基因的位置。最后表达基因。观察。 问题1：请问在克隆该基因时一定要去掉内含子吗？ 问题2：融合时是不是要把该基因的终止子去掉，直接加上荧光蛋白基因？ 问题3：因为蛋白后面加了一段荧光蛋白，会对原有的蛋白表达产生影响吗？这样做胞内定位合适吗？有没有其他更好的方法？ 问题4：融合PCR过程出现了些问题，两片段融合，而且4条引物都是顶着头儿设计的，所以出现好多杂带，怎么办呢？ 问题比较多，希望能和大家充分讨论，在此先谢谢各位！ |
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