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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 载体改造求助
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半半911

新虫 (小有名气)

[交流] 载体改造求助 已有6人参与

LZ最近在构建植物表达载体，一般的表达载体都用抗潮霉素筛选标记。现在有个改造载体的想法，将GFP基因融合至抗潮霉素基因之后，这样表达载体直接有两个筛选标记。求大神帮分析这种想法是否可行？
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1楼 2015-02-02 22:24:49
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ShirelyShine

新虫 (初入文坛)
★
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不是大神.凑个热闹.之前也在做真核表达载体构建,个人觉得理论上可行。带上GFP之后蛋白表达后应该能见到绿色荧光，但为啥不直接买那种带GFP的表达载体.这样省事很多。感觉构建质粒很麻烦的，在把GFP连上去的时候就要设计一遍酶切位点，之后连目的基因还要在选新的。。感觉很麻烦。。。
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去选择而不是被选择！
2楼2015-02-03 14:50:24
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lmzheng66

银虫 (正式写手)
应该是有利的
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3楼2015-02-03 17:06:55
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
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我有现成的载体，欢迎交流

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-02-03 18:35:59
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半半911

新虫 (小有名气)
最近尝试改造下试试
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5楼2015-02-03 18:37:06
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
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单独设计一段表达GFP吧，直接连上以后潮霉素抗性很可能没法正确表达
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
6楼2015-02-03 22:37:40
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浅语8905

新虫 (小有名气)
★
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不试，怎么知道行不行呀
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7楼2015-02-04 08:49:57
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draco1987

木虫 (正式写手)
★
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潮霉素是抗性筛选标记。GFP只是报告基因，没法当作筛选标记啊，你要是为了做筛选结果的后续检测用，也应该是把GFP标签融合到表达的基因上。这哪里叫什么两个筛选标记？而且带融合标签的表达载体在一般实验室应该都有存货，你可以找人要啊，何必自己再搞一个？如果你不想用潮霉素做抗性筛选，倒是可以换卡纳筛选标记，但是和GFP没有半毛钱关系，还是多读读基础教科书，先搞清楚GFP和潮霉素抗性标记的区别吧。
ps：楼上让人试试的都什么心态？简直谋杀时间。
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8楼2015-02-05 13:36:08
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