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jingmi

新虫 (正式写手)

[求助] 请问pET28a是干嘛用的?已有8人参与

大家好,请问pET28a是什么?干嘛用的?是某家公司特别制造的产品吗?

在分子检测中会用到吗?
能通俗地讲下它的用处吗?
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jingmi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-05 22:11:04
用处:pET是一种载体,可以将一段序列(目的基因)加到这个载体上,形成一个环状的质粒,然后 将这个质粒转入到大肠杆菌体内进行表达 ,能很好的将目的基因表达出来。
公司:Novagen一直致力于研发pET系统,还有自己的pET手册,很好
pET28a只是pET载体系列的其中之一,除此之外还有pET32a pET30a pET43.1a,pET系统是有史以来在大肠杆菌中克隆表达重组蛋白的功能最强大系统,除此以外还有pCold,pGH,pGEX等。
分子检测中会用到啊
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5楼2015-02-03 09:06:17
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6楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-02-03 09:11:25
pET28a是原核表达载体,Ka抗性,其上的HisTag标签用于蛋白纯化,属于高拷贝质粒,表达蛋白时需要TPTG诱导,同时可能产生大量包涵体

pET载体系列:一种类型需要加IPTG诱导
另一种类型不需要加IPTG诱导哦
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7楼2015-02-03 09:39:51
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13楼: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-23 22:08:00
我看懂你的解释,我想问下选择不同的载体对表达有影响吗?PET-SUMO有用过吗?由于第一次接触,是个小白,今天写实验方案选择的pET-3C,这个载体是从别人论文中看到的,而老板说不适合折叠表达的蛋白,弄的我都不知道 ...

不同的载体当然对表达有影响啊。我们一般的如果是在原核中表达的话,pET24a 28a 30a 32a 43.1a  20d 都是常用的,因为做实验嘛,就是一个摸索的过程,所以每次做实验都是选择2-3种载体进行摸索,最终确定最佳的载体。pET -sumo没有用过,这个载体在原核表达中应该不热门吧
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14楼2015-03-24 08:45:12
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15楼: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-24 10:08:06
哦,知道了,您刚刚说的几种载体,有那种是比较好用的。我也是想在原核生物中表达。
...

我刚刚说的,全部都好用,因为我们都经常用的,真的
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16楼2015-03-24 15:50:56
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17楼: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-24 16:47:56
我不是希望它好用,我喜欢它的实用性强,因为做研发,所以希望表达效率要高,不好意思哈,第一次接触,老板就是一句话自己查文献去,...


我说的好用就是实用性强的意思啊,你表达不同的蛋白(当然前提是在原核中表达)想要确定最佳载体,你得尝试各种载体才能确定啊。
还有蛋白表达的表达率高低,载体的选择只是一方面的,有时候都得进行几十个条件的优化对比才能找到最佳组合呢,尤其是基因,你在表达之前就应该优化,不然基因本身与载体宿主菌就不相容的话,怎么选择载体怎么优化实验都不会成功,不是包涵体就是没活性,总之祝福你了
http://www.detaibio.com/gene-expression-optimization.html
对优化的内容介绍的挺详细,推荐给你看看
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18楼2015-03-24 17:13:54
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19楼: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-24 19:42:03
我的目的基因就是一段确定的序列,这个在这之前也可以进行改造吗?我不知道,不过你说的有道理,明天和老板说书哦,先拿两种载体摸索下,这样看文献找也不是问题,选两个载体都有相同的两个酶切位点,估计也便宜点 ...

就我之前给你的那个网址上,上面有一段对基因合成之前的优化步骤,就是密码子优化的那一步。当然可以改造啊,而且表达出的蛋白不会变的,你可以仔细的看看
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20楼2015-03-25 08:36:18
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21楼: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-25 08:58:19
这个真的难到我了,我刚接触序列,我就要给他优化,有没有软件呀!能加你QQ详聊吗?谢谢...

可以啊,呵呵,你QQ多少
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22楼2015-03-25 09:06:02
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