24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1817  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

raymondleung

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助关于甲基化PCR实验已有2人参与

最近一直在做甲基化的PCR,一直没法获得扩增的条带,模板用的是qiagen的试剂盒处理后的DNA ,PCR是25ul的体系, 用的宝生物的GC buffer和LA taq酶。反应条件95度5min,然后开始循环,95度30s,退火30s , 72度30s,最后延伸10min,4度保温,退火从50到65度都试用了,没见条带。到底是怎么回事?求大神解答
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
raymondleung(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-09 22:12:06
循环数正常,但是针对LA的酶时间就不一定了,72℃延伸 30s 我觉得时间少了,我们做的话都是10min,终延伸min的。既然摸索了很多温度都没有成功,说明温度没有问题。
LA和热启动Taq酶或是高保真酶不一样,针对大于10kb以上的片段,使用LA扩增, 延伸时间短的话还没来得及扩增就进入下一循环了
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-02-09 14:04:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 raymondleung 的主题更新
信息提示
请填处理意见