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郭浩sli

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE 丙烯酰胺凝胶电泳，加样后逐渐上漂原因,求指导 已有5人参与

Marker和样品都是用样品缓冲液（自己配制）配制后加热处理的，然后用微量进样器注射入泳道内，刚注射完后样品汇聚在泳道底部，然后即开始逐渐沿着泳道的两侧上升。如图所示。请各位大神指点！

SDS-PAGE 丙烯酰胺凝胶电泳，加样后逐渐上漂原因,求指导
IMG_20150130_104156.jpg
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1楼 2015-01-30 20:07:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

郭浩sli

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by dehong1573 at 2015-01-31 09:26:21
只要是甘油就不应该有问题，除非根本就不是甘油，个人认为很有可能是制样出了问题，不知道LZ是什么样品，蛋白还是菌体，如果是菌直接煮样，菌体浓度过高或者细胞絮凝了，都有可能导致这种现象...

专业！谢谢！已经找出问题了，是电泳液用错了，浓度太高了。
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14楼2015-01-31 13:25:03
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普通回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郭浩sli: 金币+5, ★有帮助 2015-01-31 13:25:51
上样缓冲液没加甘油？？电极反了？？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-01-30 20:13:49
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郭浩sli

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-30 20:13:49
上样缓冲液没加甘油？？电极反了？？

谢谢！缓冲液中加甘油了，电极没反，当时没通电。我也在担心是甘油的问题，买的是500Ml 12元包装的，不知道影响大不？
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3楼2015-01-30 20:16:06
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郭浩sli(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-30 22:34:47
郭浩sli: 金币+25, ★★★★★最佳答案 2015-01-31 13:26:47
1 缓冲液问题，可能时间过长或有污染以及是否加入甘油
2 电源正负极是否正确
3 胶孔没洗干净，里面有碎胶
4 上样孔有气泡
5 loading buffer浓度低或者样品浓度低，导致样品没有被loading buffer 沉下来
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
4楼2015-01-30 20:22:09
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郭浩sli

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-30 20:22:09
1 缓冲液问题，可能时间过长或有污染以及是否加入甘油
2 电源正负极是否正确
3 胶孔没洗干净，里面有碎胶
4 上样孔有气泡
5 loading buffer浓度低或者样品浓度低，导致样品没有被loading buffer 沉下来

专家！前两个问题应该可以排除了。第三个问题，确实没洗胶孔，因为半年前做的时候也没有洗，当时没影响，加上问了另外两个课题组做的时候也都没洗。第四个问题，没有观察到有气泡。另外，如果是3、4两条的原因的话，出现所有泳道都上漂的可能性应该不大吧？关于第五个问题，我觉得更可能会引起所有泳道的异常，但我不太明白这个loading buffer具体指的是什么，请您赐教！
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5楼2015-01-30 20:43:06
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
引用回帖:
5楼: Originally posted by 郭浩sli at 2015-01-30 20:43:06
专家！前两个问题应该可以排除了。第三个问题，确实没洗胶孔，因为半年前做的时候也没有洗，当时没影响，加上问了另外两个课题组做的时候也都没洗。第四个问题，没有观察到有气泡。另外，如果是3、4两条的原因的话 ...

上样缓冲液啊
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
6楼2015-01-30 20:51:19
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郭浩sli

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-30 20:22:09
1 缓冲液问题，可能时间过长或有污染以及是否加入甘油
2 电源正负极是否正确
3 胶孔没洗干净，里面有碎胶
4 上样孔有气泡
5 loading buffer浓度低或者样品浓度低，导致样品没有被loading buffer 沉下来

您好！我刚查了loading buffer，我用的是一倍的SDS样品缓冲液。请问这缓冲液中用的甘油是12元500ML 包装的，可能会有影响吗
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7楼2015-01-30 20:55:54
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郭浩sli: 金币+2, ★有帮助 2015-01-31 13:28:26
引用回帖:
7楼: Originally posted by 郭浩sli at 2015-01-30 20:55:54
您好！我刚查了loading buffer，我用的是一倍的SDS样品缓冲液。请问这缓冲液中用的甘油是12元500ML 包装的，可能会有影响吗...

必须用分子级甘油，纯度99.9%那种，这样上样就不会飘起来了。
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追梦的人
8楼2015-01-30 22:30:59
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影射苍穹

木虫 (小有名气)
样品的成分是啥，样品中溶剂是啥，与上样缓冲液的比例是多少啊，当然了要确定你的甘油是分析纯以上的

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9楼2015-01-31 00:19:11
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郭浩sli: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-01-31 13:27:43
引用回帖:
3楼: Originally posted by 郭浩sli at 2015-01-30 20:16:06
谢谢！缓冲液中加甘油了，电极没反，当时没通电。我也在担心是甘油的问题，买的是500Ml 12元包装的，不知道影响大不？...

只要是甘油就不应该有问题，除非根本就不是甘油，个人认为很有可能是制样出了问题，不知道LZ是什么样品，蛋白还是菌体，如果是菌直接煮样，菌体浓度过高或者细胞絮凝了，都有可能导致这种现象
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
10楼2015-01-31 09:26:21
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