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jingxuegood

新虫 (正式写手)

[求助] 求助土壤酸性磷酸酶活性测定的详细方法~~~ 已有4人参与

试验需要测定土壤酸性磷酸酶活性,想用对硝基苯磷酸二钠比色法,但查到的方法不够详细。有的说要每个样品都要做空白对照,有点没有提及这点;关于标准曲线的测定时加入的试剂也不尽相同,现在很是混乱。望做过相关试验的人士给予详细方法和相关指点,非常感谢!!!
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macjr

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by leoabby at 2015-03-26 17:53:43
追问,配制缓冲液的时候需要准确调ph值么?...

不需要啊。按照提示的配置就是了。基本上不会有问题。
8楼2015-03-26 20:52:30
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macjr

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jingxuegood: 金币+2, 有帮助 2015-01-27 20:26:18
不是空白对照,是无基质对照。。每个土样都必须,其实网络上的方法都一样,酸性磷酸酶最后的反应液反应条件是在碱性的环境下的
2楼2015-01-27 09:22:01
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jingxuegood

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by macjr at 2015-01-27 09:22:01
不是空白对照,是无基质对照。。每个土样都必须,其实网络上的方法都一样,酸性磷酸酶最后的反应液反应条件是在碱性的环境下的

你好,感谢回复。我想问一下,你说的“酸性磷酸酶最后的反应液反应条件是在碱性环境下的”是什么意思呀?缓冲液pH是多少呀?用PNPP做基质,醋酸-醋酸钠做缓冲液时,测定标准曲线都需要加入什么试剂呢?有点混乱,能不能给我发一份详细的测定方法呢?非常感谢~~~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2015-01-27 20:25:59
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macjr

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jingxuegood at 2015-01-27 20:25:59
你好,感谢回复。我想问一下,你说的“酸性磷酸酶最后的反应液反应条件是在碱性环境下的”是什么意思呀?缓冲液pH是多少呀?用PNPP做基质,醋酸-醋酸钠做缓冲液时,测定标准曲线都需要加入什么试剂呢?有点混乱,能 ...

土壤磷酸酶(酸性)
(一)试剂
1. pH5醋酸盐缓冲液:
A:0.2mol/L 醋酸溶液(11.55ml稀释至1000ml)
B:0.2mol/L醋酸钠溶液 A液14.8ml+B液35.2ml稀释至100ml
2. 0.5%磷酸苯二钠:pH5醋酸缓冲液
3. 氯代二溴对苯醌亚胺:称取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺,用10ml 96%乙醇(48ml乙醇+2ml水)溶解,贮存于棕色瓶中,存放在冰箱中,保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。
4. 酚标准溶液:酚原液---取1g苯酚溶于蒸馏水中,定容至1000ml水中,保存于棕色瓶中。酚工作液---取10ml酚原液稀释至1000ml水中,每毫升含0.01mg酚
5. 甲苯
6. pH9.4硼酸缓冲液:A液:0.05mol/L硼砂 B液:0.2mol/L氢氧化钠
A液50ml+B液11ml 稀释至200ml
(二)实验步骤
1. 标线制作
取0,1,3,5,7,9,11,13ml酚工作液,置于50ml比色管中,加入5ml缓冲液(pH9.4硼酸缓冲液)和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度,30min后比色测定于660nm波长下测定吸光度。
2. 样品测定
称取风干土样(过1mm筛,去除杂质)2.0000g,放置于100ml离心管中,加1ml甲苯,15min后加入20ml 0.5%磷酸苯二钠,仔细摇匀后放置于37°C恒温箱中陪养24h,后培养液中加入50ml蒸馏水离心过滤。吸取滤液1ml于50ml比色管中,按标准曲线方法显色,并测定吸光度。
同时做空白实验和每一土样的无基质对照
(三)数据计算
以24小时每克土壤中释放出酚的毫克数表示
我的方法

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4楼2015-01-28 09:12:37
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