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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 农林综合 » 关于土壤中过氧化氢酶活性的测定
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imchunfan

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于土壤中过氧化氢酶活性的测定 已有4人参与

土壤中过氧化氢酶活的测定方法：称取3.00g新鲜土样于150ml三角瓶，加入40ml蒸馏水和5ml 0.3％ H2O2，重复三次，封口膜封口。同时设置对照，不加土样。将三角瓶置于120次/min，30℃恒温振荡30min。立即加入10ml 3N H2SO4终止反应，用中速定性滤纸过滤。吸取25ml 滤液，用0.01N KMnO4滴定至微红色，样品一滴一滴滴30s。
关于这个实验我有一些问题：
1、我空白的滴定量就比较低，只有5点几ml，土壤样品的滴定量就更低了，几滴就会变成粉红色了，我想问下，这种情况是正常的吗？如果是这样的话，误差肯定很大呀，是否要调整一下 H2O2或者KMnO4的浓度呢？为什么不提高 H2O2的浓度或者降低KMnO4的浓度呢？
2、滴定过程三角瓶中液体变为粉红色，但是隔一段时间就会褪色，这种情况是正常的嘛？感觉这种情况下也会增加误差的呀！
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1楼 2014-10-23 10:57:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

luo88

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好！试验方法不是死的，要灵活运用，针对自己的试验进行小改动也是可以的（前提是必须合理）。第一个问题，鉴于样品滴定时，应该是降低高锰酸钾的浓度，进行滴定，30s不褪色就认为到达终点，记录消耗量。
第二个问题，高猛酸钾本身就是一个强氧化剂，易变，要低温储存，必要时现配现用。
仅供参考，希望有所帮助。
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3楼2014-10-24 09:30:01
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a2004054

金虫 (知名作家)

快乐家族-安

优秀版主

【答案】应助回帖

楼上说的对，可以降低高锰酸钾浓度，过氧化氢浓度则不可以随意更改，以免影响试验反应进程
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随遇而安
5楼2014-10-26 12:04:45
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普通回帖

imchunfan

新虫 (初入文坛)
有没有人可以解答一下呀？？
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2楼2014-10-23 16:25:56
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imchunfan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luo88 at 2014-10-24 09:30:01
你好！试验方法不是死的，要灵活运用，针对自己的试验进行小改动也是可以的（前提是必须合理）。第一个问题，鉴于样品滴定时，应该是降低高锰酸钾的浓度，进行滴定，30s不褪色就认为到达终点，记录消耗量。
第二个 ...

就是说高锰酸钾的浓度是可以降低后再进行滴定的啦，谢谢你啦
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4楼2014-10-24 18:27:58
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macjr

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by imchunfan at 2014-10-24 18:27:58
就是说高锰酸钾的浓度是可以降低后再进行滴定的啦，谢谢你啦...

同时，如果可以的话选择用吸光度的方法，《紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性》可以参照这个文献，但是对于文献中加入硫酸铝钾，然后在过滤，基本上没有用，而且过滤时间长；我做的时候是选择了离心2分钟，然后迅速过滤至硫酸溶液中，然后在稀释，进行测定吸光度的。
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6楼2014-10-27 08:16:18
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shanshan柳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by macjr at 2014-10-27 08:16:18
同时，如果可以的话选择用吸光度的方法，《紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性》可以参照这个文献，但是对于文献中加入硫酸铝钾，然后在过滤，基本上没有用，而且过滤时间长；我做的时候是选择了离心2分钟，然后 ...

请问一下文献中的那个公式是不是有问题
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7楼2015-04-15 17:17:35
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shanshan柳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by macjr at 2014-10-27 08:16:18
同时，如果可以的话选择用吸光度的方法，《紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性》可以参照这个文献，但是对于文献中加入硫酸铝钾，然后在过滤，基本上没有用，而且过滤时间长；我做的时候是选择了离心2分钟，然后 ...

不过滤会不会对测试结果有影响，初做酶活实验，求大神帮助
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8楼2015-04-15 17:24:39
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macjr

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by shanshan柳 at 2015-04-15 17:17:35
请问一下文献中的那个公式是不是有问题...

没有问题的。。我一开始也怀疑的。但是确实没错
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9楼2015-04-16 07:40:00
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macjr

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by shanshan柳 at 2015-04-15 17:24:39
不过滤会不会对测试结果有影响，初做酶活实验，求大神帮助...

当然要过滤啊。过滤了才能终止反应。
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10楼2015-04-16 07:40:51
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