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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 发酵中噬菌体感染大肠杆菌
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liutingting_

新虫 (初入文坛)

[求助] 发酵中噬菌体感染大肠杆菌 已有5人参与

菌种：大肠杆菌
诱导前：未发现感染现象，菌种生长良好
IPTG诱导两个小时后：开始出现菌体自溶现象，OD迅速下降，并降为0。
经检测：确定IPTG灭菌彻底。
求问噬菌体感染原因。Ps：这种感染现象已经连续出现很多次了，且每次噬菌体感染均出现在添加完IPTG两个小时之后，每次都会用甲醛以及二氧化氯消毒。
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1楼 2015-01-22 10:02:43
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fjch2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2015-01-23 10:08:44
liutingting_: 金币+1, ★有帮助 2015-01-24 11:25:22
你检测确定是噬菌体吗？
我倒是建议你先考虑一下IPTG的浓度问题，是否过高，导致细菌死亡；
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2楼2015-01-22 14:45:01
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思凡

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liutingting_: 金币+1 2015-01-24 11:25:29
建议你好好镜检一下，我赞同楼上的观点，会不会浓度太高导致的菌体死亡
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3楼2015-01-22 16:21:41
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liutingting_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fjch2005 at 2015-01-22 14:45:01
你检测确定是噬菌体吗？
我倒是建议你先考虑一下IPTG的浓度问题，是否过高，导致细菌死亡；

IPTG是0.3mmol/L，浓度是正常的诱导浓度
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4楼2015-01-23 10:16:56
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思凡

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
liutingting_: 金币+1 2015-01-24 14:05:01
引用回帖:
4楼: Originally posted by liutingting_ at 2015-01-23 10:16:56
IPTG是0.3mmol/L，浓度是正常的诱导浓度...

你这个浓度是自己做实验做出来的还是参考的人家的文献，我们经梯度摸索，我们是0.2mM
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5楼2015-01-24 13:32:04
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liutingting_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 思凡 at 2015-01-24 13:32:04
你这个浓度是自己做实验做出来的还是参考的人家的文献，我们经梯度摸索，我们是0.2mM...

自己做出来的，谢谢
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6楼2015-01-24 14:04:26
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思凡

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by liutingting_ at 2015-01-24 14:04:26
自己做出来的，谢谢...

那你好好镜检下你的吧，所有的东西都灭菌彻底，IPTG浓度也合适，我们都好好的啊，从没出过问题，搞不懂了
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7楼2015-01-24 14:33:32
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coffee159

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用被污染的菌液做个噬菌斑实验，确认一下是不是噬菌体污染。如果污染了，光消毒还是不彻底的，用新的菌株吧。
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8楼2015-01-24 21:01:01
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也有在加IPTG诱导后，大肠杆菌死亡，也找了很多原因，也做过镜检，也做过噬菌斑实验，最后是怀疑IPTG被污染了，我们IPTG浓度控制在0.2~0.4mm。你是如何检测IPTG是无菌的呢？是不是加IPTG时污染了？
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9楼2015-01-25 15:28:19
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醒时有语

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by coffee159 at 2015-01-24 21:01:01
用被污染的菌液做个噬菌斑实验，确认一下是不是噬菌体污染。如果污染了，光消毒还是不彻底的，用新的菌株吧。

请问是重新用新的感受态细胞转化即可吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2015-04-08 14:18:34
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