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woshiguiren

木虫 (小有名气)

[求助] 有关大肠杆菌OD值,急急急!!! 已有4人参与

实验室条件有限,想请教一下大肠杆菌培养多久OD600可以达到4.5,陪养条件是37℃,190rpm?如果IPTG诱导,又得多长时间?告知个大概时间就行,是不是过夜?(菌的情况良好)

[ Last edited by woshiguiren on 2014-1-7 at 14:09 ]
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充实的生活
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
woshiguiren: 金币+5 2014-01-29 12:33:52
如果不做高密度发酵,大肠杆菌的OD很难达到4.5。普通试管摇过夜通常是2左右。
IPTG的诱导的浓度、时间和温度对不同的蛋白不一样,需要自己试。通常要先做预实验优化诱导条件。
2楼2014-01-07 14:22:42
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woshiguiren

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 14:22:42
如果不做高密度发酵,大肠杆菌的OD很难达到4.5。普通试管摇过夜通常是2左右。
IPTG的诱导的浓度、时间和温度对不同的蛋白不一样,需要自己试。通常要先做预实验优化诱导条件。

请问,大肠杆菌,液体培养,过夜(14-16小时)OD600一般能够有多大?
充实的生活
3楼2014-01-07 14:38:38
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woshiguiren

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 14:22:42
如果不做高密度发酵,大肠杆菌的OD很难达到4.5。普通试管摇过夜通常是2左右。
IPTG的诱导的浓度、时间和温度对不同的蛋白不一样,需要自己试。通常要先做预实验优化诱导条件。

不是试管,是锥形瓶液体培养
充实的生活
4楼2014-01-07 14:40:04
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-01-07 22:38:53
大肠杆菌液体培养OD值大小跟培养基也有关系,这个已经做过验证,用改过后的配方一般培养为24hr,IPTG诱导时间,温度及时间长短像2楼所说一样,你得自个去摸索,去优化。祝楼主好运!
希望大家多多交流。
5楼2014-01-07 16:22:29
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
woshiguiren: 金币+5 2014-01-29 12:33:28
培养到4.5是能做到的,需要12小时左右。
将菌在平板和种子瓶中活化好转接培养基就可以。
但是,如楼上面说的,与培养基和培养条件也有关系。
祝好运!
6楼2014-01-07 22:36:55
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是LB吗? 感觉LB要到4.5很难啊,
可以用TB培养
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
7楼2014-01-07 23:42:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by woshiguiren at 2014-01-07 14:38:38
请问,大肠杆菌,液体培养,过夜(14-16小时)OD600一般能够有多大?...

锥形瓶摇菌过夜后的OD与试管差不多,OD600一般是2多一点。我一般是用LB摇的,其它rich培养基可能会有不同的OD。
8楼2014-01-08 01:20:22
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战斗节能

金虫 (小有名气)

培养多久OD600可以达到4.5看接种量!诱导可以过夜也可以不过夜,看你诱导温度,和需要的表达量等!
9楼2014-06-18 16:23:45
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