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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】在体肠灌流实验，测定药物浓度异常
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jonathonswq

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】在体肠灌流实验，测定药物浓度异常

各位大牛，最近做了一个药物的在体肠灌流实验，但测得药物浓度基本不呈线性，甚至有时还上下波动，请达人指教。
我的药物是三萜皂苷，具体条件如下：
灌流液：krebs-ringer， 从sigma买的，后来添加了氯化钙和碳酸氢钠。采用酚红做体积校正，酚红浓度为20ug/ml。
药物浓度：5ug/ml，10ug/ml。该药物在krebs-ringer 缓冲液中的溶解度应该大于30ug/ml的。
试验方法：麻醉后，小肠上端，回肠下端结扎后插管。生理盐水冲洗干净后通入krebs-ringer缓冲液，氧气-二氧化碳（95：5），流速 2ml/min，开始10分钟后记为0时刻，随后流速为1ml/min。每半小时取样1ml，并补入同体积含酚红的缓冲液。
测了四五次了，药物剩余量总是不呈下降的线性，求大牛指点。
另外，灌流期间，需要大鼠保持清醒状态吗？貌似清醒状态大鼠会很痛苦一直挣扎，我一直在麻醉状态下测定药物肠道吸收的。
谢谢了。
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1楼 2011-04-06 16:35:54
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向上小虫

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by jonathonswq at 2011-06-07 10:48:40
最近改为单通灌注，但普遍药物流出浓度高于供侧浓度，但由于进多出少，一部分时间点还是可以计算得到正的Papp值，但部分时间点测得Papp值居然为负值。
对于温度，我是采用台灯对手术区域加热的，保温应该不是问题。 ...

请教一下，我现在做单向肠灌流，只是灌流硅胶管的时候就出现了你这个问题，流出浓度高于供测浓度，硅胶管是用乙醇浸泡清洗的，不知道是什么原因，你在做的时候这个问题是怎么解决的呢？
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16楼2015-06-09 17:52:33
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普通回帖

jonathonswq

木虫 (正式写手)
牛人们给点意见吧，放上来几天了，连个光顾的也没有，俺心里好凉啊。
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2楼2011-04-10 21:24:59
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小xiao

新虫 (初入文坛)

一点意见

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
qinhy(金币+1): O(∩_∩)O谢谢~~~ 2011-04-11 09:56:37
jonathonswq(金币+1): 谢谢回复，对我帮助很大。 2011-06-14 23:22:50
你可以换一种重量法，试一下，因为酚红本身其实也存在着吸收，它的误差挺大的。你可以采取重量法测一下，这个误差相对要小一点，得的数据可能会好一点。
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3楼2011-04-11 09:13:49
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chc灰太羊

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
jiangchunyong(金币+1): 谢谢！ 2011-04-12 09:50:48
jonathonswq(金币+1): 谢谢回复，受益匪浅。 2011-06-15 22:53:41
大鼠肯定要麻醉的
你的药物剩余量不成下降趋势会不会是因为你流速太快
肠子吸收少
你可以把流速调成200ul/min或者尝试下别的流速
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4楼2011-04-11 09:59:34
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chc灰太羊

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
为什么要补入同体积含酚红的缓冲液？
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5楼2011-04-11 10:03:04
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sunny_1105

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是循环灌流还是单向灌流呀？循环灌流要补足取样体积，补体积时引起的药物浓度变化计算了吗？小肠也会吸收水分的，据我的实验结果，小肠吸收的水分会很多。另外，平衡10min就取样，会不会时间有点短？大鼠是要麻醉的。
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6楼2011-04-11 13:08:28
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sunny_1105

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 小xiao at 2011-04-11 09:13:49:
你可以换一种重量法，试一下，因为酚红本身其实也存在着吸收，它的误差挺大的。你可以采取重量法测一下，这个误差相对要小一点，得的数据可能会好一点。

我也用0.2ml/min
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7楼2011-04-11 13:09:35
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jonathonswq

木虫 (正式写手)
谢谢大家的关注，我又查了一下文献，循环灌流的一般用2.5ml/min，一过式灌流为0.1-0.4ml/min。我的疑问是，会不会我的流速太低了，但循环灌流我也看到部分文献用1ml/min的流速。
另外，我会试试重量法是否会好些，谢谢小xiao同学和各位站友的建议。

[ Last edited by jonathonswq on 2011-4-12 at 00:12 ]
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8楼2011-04-12 00:11:21
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880110sj

金虫 (正式写手)
是不是没有保温呢？
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9楼2011-04-30 11:21:19
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jonathonswq

木虫 (正式写手)
最近改为单通灌注，但普遍药物流出浓度高于供侧浓度，但由于进多出少，一部分时间点还是可以计算得到正的Papp值，但部分时间点测得Papp值居然为负值。
对于温度，我是采用台灯对手术区域加热的，保温应该不是问题。
对于Papp得到负值实在有点不解，达人指点啊。
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10楼2011-06-07 10:48:40
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guona0329

木虫 (小有名气)
★
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我想开展在体肠灌流是实验，但是我有蠕动泵和循环水浴，但是不知道管路怎么办？自制吗？制成什么样的呢？
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11楼2011-06-10 09:12:01
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jonathonswq

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by guona0329 at 2011-06-10 09:12:01:
我想开展在体肠灌流是实验，但是我有蠕动泵和循环水浴，但是不知道管路怎么办？自制吗？制成什么样的呢？

我用的是蠕动泵配的硅胶管路，你可以在入口和出口各接一条就可以构成闭合回路了。
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12楼2011-06-10 10:17:50
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guona0329

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by jonathonswq at 2011-06-10 10:17:50:
我用的是蠕动泵配的硅胶管路，你可以在入口和出口各接一条就可以构成闭合回路了。

哦，我看明白了，我想把肠分得再细些，多插几根管，难办了～
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13楼2011-06-10 11:09:15
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jonathonswq

木虫 (正式写手)
可以的，最多可以分四段的，十二指肠，控场，回肠，结肠。如法炮制就行了。
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14楼2011-06-10 18:37:39
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zhanghaibo-

新虫 (初入文坛)
★
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我也遇到了同样的情况，2.5ml/min循环灌流，结果剩余药量是上升的线性，，，，我只想到了是不是流速过快，，还有别的原因么？温度还有大鼠存活状态都挺好的呀，，
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15楼2015-05-17 21:54:58
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sunshilin

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by 向上小虫 at 2015-06-09 17:52:33
请教一下，我现在做单向肠灌流，只是灌流硅胶管的时候就出现了你这个问题，流出浓度高于供测浓度，硅胶管是用乙醇浸泡清洗的，不知道是什么原因，你在做的时候这个问题是怎么解决的呢？...

我现在也在做肠灌流，得出的P%值有的是负数，实在想不通了，你有过吗？
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17楼2015-07-06 09:04:37
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sunshilin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by zhanghaibo- at 2015-05-17 21:54:58
我也遇到了同样的情况，2.5ml/min循环灌流，结果剩余药量是上升的线性，，，，我只想到了是不是流速过快，，还有别的原因么？温度还有大鼠存活状态都挺好的呀，，

我也在做单向肠灌流，得到P%偶尔会是负数，你有过这样的情况吗？
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18楼2015-07-06 09:05:39
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xiaobudian_y

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主的酚红是买的还是自己配的啊
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19楼2016-04-14 20:02:08
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