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[交流]
【求助】在体肠灌流实验,测定药物浓度异常
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各位大牛,最近做了一个药物的在体肠灌流实验,但测得药物浓度基本不呈线性,甚至有时还上下波动,请达人指教。 我的药物是三萜皂苷,具体条件如下: 灌流液:krebs-ringer, 从sigma买的,后来添加了氯化钙和碳酸氢钠。采用酚红做体积校正,酚红浓度为20ug/ml。 药物浓度:5ug/ml,10ug/ml。该药物在krebs-ringer 缓冲液中的溶解度应该大于30ug/ml的。 试验方法:麻醉后,小肠上端,回肠下端结扎后插管。生理盐水冲洗干净后通入krebs-ringer缓冲液,氧气-二氧化碳(95:5),流速 2ml/min,开始10分钟后记为0时刻,随后流速为1ml/min。每半小时取样1ml,并补入同体积含酚红的缓冲液。 测了四五次了,药物剩余量总是不呈下降的线性,求大牛指点。 另外,灌流期间,需要大鼠保持清醒状态吗?貌似清醒状态大鼠会很痛苦一直挣扎,我一直在麻醉状态下测定药物肠道吸收的。 谢谢了。 |
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