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jonathonswq

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】在体肠灌流实验，测定药物浓度异常

各位大牛，最近做了一个药物的在体肠灌流实验，但测得药物浓度基本不呈线性，甚至有时还上下波动，请达人指教。
我的药物是三萜皂苷，具体条件如下：
灌流液：krebs-ringer，从sigma买的，后来添加了氯化钙和碳酸氢钠。采用酚红做体积校正，酚红浓度为20ug/ml。
药物浓度：5ug/ml，10ug/ml。该药物在krebs-ringer 缓冲液中的溶解度应该大于30ug/ml的。
试验方法：麻醉后，小肠上端，回肠下端结扎后插管。生理盐水冲洗干净后通入krebs-ringer缓冲液，氧气-二氧化碳（95：5），流速 2ml/min，开始10分钟后记为0时刻，随后流速为1ml/min。每半小时取样1ml，并补入同体积含酚红的缓冲液。
测了四五次了，药物剩余量总是不呈下降的线性，求大牛指点。
另外，灌流期间，需要大鼠保持清醒状态吗？貌似清醒状态大鼠会很痛苦一直挣扎，我一直在麻醉状态下测定药物肠道吸收的。
谢谢了。

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1楼 2011-04-06 16:35:54

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jonathonswq

木虫 (正式写手)

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谢谢大家的关注，我又查了一下文献，循环灌流的一般用2.5ml/min，一过式灌流为0.1-0.4ml/min。我的疑问是，会不会我的流速太低了，但循环灌流我也看到部分文献用1ml/min的流速。
另外，我会试试重量法是否会好些，谢谢小xiao同学和各位站友的建议。

[ Last edited by jonathonswq on 2011-4-12 at 00:12 ]