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提取土壤总DNA跑胶没条带 求助
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黄太帝
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专业: 微生物学
[交流]
提取土壤总DNA跑胶没条带 求助
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最近在提取土壤DNA,提取些出来的DNA直接跑水平胶有条带,不过较暗
提取些出来的DNA经过PCR后却没有条带了,这是怎么回事,怎么改进呢?求赐教。
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼
2015-01-12 19:39:32
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专业: 抗体工程学
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西门吹雪170:
2015-01-13 22:26:56
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流
2015-01-13 22:27:37
您好啊,水平胶有条带,但是暗,以为PCR之后能够得到较多的量,但是PCR之后却啥都没有,所以问题肯定出在你PCR的过程中啊。
PCR过程中出现问题,得不到条带,可以考虑一下几个方面:
①引物设计是否合理
②PCR时的反应体系,尤其是酶,普通Taq酶有错配(但不至于一点也扩不出来,可以换成热启动Taq酶
热启动Taq酶
③ 扩增前 模板是否已经降解
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todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼
2015-01-13 09:42:48
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korchagin
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专业: 环境微生物学
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也许是土壤中干扰物过多,酚氯仿那步多洗一次试试看
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2楼
2015-01-13 08:26:16
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distant616
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注册: 2010-10-01
专业: 环境工程
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用试剂盒提取DNA吧,方便快捷提取效果好。Mobi0公司的,Power soil isolution kit.
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3楼
2015-01-13 09:09:52
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银虫
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注册: 2011-03-13
性别: GG
专业: 食品科学基础
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很有可能是土壤中的杂质污染,如腐殖酸
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好好学习天天向上
5楼
2015-01-13 11:52:55
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